光合细菌（球形假单胞菌）发酵产辅酶qlt;,10gt;的研究.pdfVIP

光合细菌(球形红假单胞菌)发酵产辅酶Q，o的研究 摘要 微生物发酵法生产辅酶Qlo是最有潜力实现工业化的生产方法，辅酶Qlo的 医疗价值和保健功能不断得到应用，光合细菌富含辅酶Qlo，因此本论文以球形 筛选出抗罗红霉素突变株，然后以该突变株为出发菌株，筛选得到耐对羟基苯甲 次后，其辅酶Qlo的产量为49．5mg：／L，比原始菌株R．sphaeroidesR1(16．37mg／L) 提高了202．38％。证明经紫外诱变和亚硝基胍复合诱变获得的突变株PHBr-2的 性状能稳定遗传。 采用紫外分光光度法测定辅酶Q10含量，确定以碱皂化法提取辅酶Q10，并 对碱皂化法进行优化，得到了碱皂化法的工艺为：茵悬液离心并洗涤菌体，在湿 3．0 菌体中加入5mL丙酮，冰浴条件下超声波破碎并移入圆底烧瓶中，加入pH 的酸性水10mL，搅拌均匀，90℃下回流1h，缓慢加入10％NaOH15mL混匀， 90℃回流1h，迅速冷却，加入25mL正己烷提取2次，合并萃取液，去离子水 洗至中性，以无水硫酸钠脱水至澄清，真空旋转蒸发浓缩，再用10mL无水乙醇 溶解，即得辅酶Qlo的抽提液。 Q10的生产起促进作用。通过正交实验法确定了最优的发酵培养基为(∥L)：无 水乙酸钠1，柠檬酸钠2，蛋白胨3，酵母膏3，硫酸铵7，磷酸二氢钾3，硫酸 镁1，氯化钠2，碳酸氢钠1，加入微量元素溶液、维生素溶液各ImL。最佳培 前(49．5rag／L)提高了50．30％。 用硅胶柱层析法对辅酶Q，o粗提液进行分离纯化。比较了不同孔径分布的 硅胶为固定相，以正己烷／无水乙醇(V～=8：2)为流动相洗脱，经过无水乙醇 结晶纯化，辅酶Qlo粗提液的提纯率为77．08％。 。 通过对该菌不同培养模式的初步探索，将接种后的发酵培养基在30℃、 1 过观察溶氧、pH值在发酵过程中的变化，得出溶氧是辅酶Q10发酵中的重要因 素，因此今后可通过探讨不同的培养模式及溶氧水平的控制提高辅酶Qlo的产量。 关键词：球形红假单胞菌；发酵；辅酶Qto：诱变选育；硅胶柱层析 ontheFermentati onProducti onof 010 Study Coenzymeby C r i Bactei Photosyntheta—Rhodopseudomonas Abstract The microbefermentationisthe of most coenzyme production Q10by potential method hasbeenusedas tobeindustrialized．Recently,coenzymeQ10 not only medicinealsofood becauseofits but acti啊ties． supplements physiological cellscontain amountsof bacterial Photosynthetic large coenzymeQlo，so