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八种海参中主要海参皂苷的结构特性研究 八种海参中主要海参皂苷的结构特性研究 摘 要 海参(seacucumber)是我国一种传统的海洋滋补品，富含多种生理活性成 分，具有较高的食用和药用价值。海参皂苷是海参体内最重要的活性成分之一， 具有抗肿瘤、抗真菌、免疫调节、细胞毒作用和溶血作用等多种生理活性。本论 文对仿刺参中的皂苷组分做了分离鉴定，并采用ESI．MS的方法对其质谱的裂解 规律进行了研究，采用HPLC的方法建立了仿刺参皂苷指纹图谱，随后成功将此 方法延伸到了其他8种海参的皂苷特征图谱和结构分析中。本论文的研究和结果 为海参品质的评价、海参种类的鉴别以及建立海参质量评价标准提供了理论基础 和科学依据，对促进海参产业的发展具有重要的理论意义和应用价值。本文主要 内容包括以下几个部分： japonicus)体壁中分离得到6种海参皂苷化合物，根据化合物的理化性质和波谱 数据，共鉴定了3种皂苷化合物的结构，分别为：cladolosideB，holotoxinAl和 holotoxin B1。 2．采用电喷雾飞行时间质谱技术(ESI．TOF—MS)，在负离子检测方式下， 对9种皂苷化合物的质谱裂解途径进行了研究。通过ESI．MS产生的【M．H】．／ 【M-Na]一获得了相应化合物的分子质量信息。对【M—H】一／【M-Na]一进行碰撞诱导解 离(CID)获得了相应化合物的裂解途径信息。在二级质谱中，糖链上无硫酸酯 基取代的皂苷发生糖苷键的断裂，连续丢失糖链的末端单糖，最后生成苷元的特 征碎片离子，这些特征有助于皂苷的结构解析。糖链上有硫酸酯基取代的皂苷不 发生糖苷键的断裂，而是发生了苷元的裂解，生成了更加稳定的结构。将其进行 脱硫酸化处理后，其脱硫产物的MS／MS图谱中出现糖链上单糖顺序脱落形成的 碎片峰。根据已知皂苷的二级质谱裂解规律，对仿刺参体内提取出的3种含量较 少，无法进行核磁分析的皂苷单体进行了质谱分析，推测出了3种皂苷的结构。 为仿刺参的质量控制提供了，新的方法。实验采用固相萃取(SPE)制备供试品溶 八种海参中主要海参皂苷的结构特性研究 SB．C1 液，选用Zorbox8色谱柱(250minx4．6mln，5 fish)，以乙腈．0．】％磷酸水溶 液为流动相进行梯度洗脱，柱温30℃，流速1．0mL／min，检测波长为205nln。分 析了不同产地的10批仿刺参样品，采用国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图 谱相似度评价系统(2004A版)”处理谱图，确定了6个共有峰。计算了10个样本 问的指纹图谱相似度，所得相似度计算结果均大于0．97。该方法具有良好的稳定 性和重现性，可用于仿刺参的质量控制。 4．采用SPE．HPLC方法研究了8种海参的总皂苷特征图谱，比较不同种海参 SB．C18 间皂苷的组成及含量差异，为海参的品种鉴定提供依据。使用Zorbax (250mmx4．6 mm，Spin)色谱柱，以乙腈．0．1％的三氟乙酸水溶液为流动相梯度 洗脱，柱温30℃，流速1．0mL／min，检测波长205nm。对不同海参体内皂苷类成 分进行HPLC分析，所得图谱特征性强，8种海参的各皂苷成分均得到很好的色谱 分离。结果表明不同海参体内的皂苷组成及含量有明显差异，所建立的方法简便、 可靠，可用于海参的品种鉴定。 5．采用HPLC．MS／MS联用技术，对8种海参体内主要的皂苷类成分进行了 定性鉴定。选用Eclipse 碳酸氢铵水溶液为流动相进行梯度洗脱，通过与电喷雾飞行时间质谱联用获得各 皂苷成分的精确分子量和分子式，通过碰撞诱导解离技术(CID)获得各化合物 的裂解信息。每种海参选取含量较高具有代表性的几种皂苷作为其特征峰，通过 定性鉴定，确认了每种海参独特的皂苷组成，并结合文献对部分己知皂苷化合物 的结构进行了初步鉴定。该技术还可用于新皂苷化合物的快速检测，为寻找新颖 的皂苷化合物提供快速简便的方法。 关键词：海参皂苷；高效液相色谱；质谱；特征图谱：指纹图谱 八种海参中主要海参皂苷的结构特性研究