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不同桑黄菌株种性及多糖活性研究 摘要 桑黄，又名鲍氏层孔菌Phellinus 已知生物抗癌领域有效率最高的大型真菌，其显著的抗肿瘤功效日 益引起人们的重视。在人们注重开发桑黄的情况下，市场上出现了 不同名称的桑黄菌株，其中有不少为同物异名或同名异物，菌株名 称的混乱影响其开发利用。本课题广泛收集国内外现有的l0个桑黄 桑黄菌株，通过形态培养观察、拮抗试验、酯酶同工酶分析和 fied RAPD(RandomAmpliPolymorphicDNA)分子标记方法对参试桑 黄菌株的种性进行分析，并对优选出的桑黄菌株的多糖含量和活性 进行研究，为桑黄资源开发提供科学依据。 实验通过聚丙烯酰胺酯酶同工酶凝胶电泳、拮抗实验和菌丝培 养观察对1O个桑黄菌株进行了分析。结果表明：酯酶同工酶电泳共 l 6条。S0与S9、 检出56条谱带，其中迁移率(Rf)不同的谱带1 1 S9与S8、S4与S0、S4和S5、S1与S7的酶谱差异明显(联合系 达到O．7左右)。酯酶同工酶分析结果与拮抗试验和菌丝培养观察结 果一致。根据结果将其分为5类：S 1 类，S2和S0为一类，S5和S9成一类，S8自成一类。 钠)法提取的桑黄菌株的DNA电泳检测条带清晰，无拖尾，说明其 纯度高，适合做为分子标记的模板。 1 正交实验确定了桑黄RAPD反应体系，当模板DNA laL，Buffer uL， 引物l 1 pL，H209．6肛L时RAPD产物电泳检测条带清晰，便于分析。 从供试的1OO个随机引物中筛选出l5个引物进行扩增，15个随机引 物在7个供试菌株上都获得了较稳定的基因图谱，共扩增出167条 O 清晰可用的DNA片段，其中1l条为多态性条带，占60．5％。结果 DistanceCluster 显示当聚类重新标定距离(Rescaled 时，可以将7个桑黄菌株分为4个种群，Sl、S3、S6、S7为一类， S8、S9、S10各成一类。 应用经典的水提醇沉方法对桑黄不同菌株的菌丝体多糖进行提 取并制作苯酚．硫酸法和DNS法标准曲线对其含量进行测定，结果显 示S4和S7的多糖含量较高，达到O．7 g／g(多糖重／粗多糖重)，而 S3和S6的多糖含量仅为0．2 g／g左右。 通过薄层色谱法研究了菌丝体和子实体多糖的单糖组成，结果 显示：①子实体多糖的单糖斑点颜色较菌丝体深，说明其含量相对 较高；②子实体多糖的单糖组成为木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露 糖、鼠李糖；菌丝体多糖的单糖组成为木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、 鼠李糖。 建立Slso-抗癌动物实验模型，对菌丝体多糖和子实体多糖的抗 癌活性进行研究，结果显示：①菌丝体多糖和子实体多糖都具有抗 癌活性；②子实体多糖的抑瘤率(51．05％)要高于菌丝体多糖 (32．1O％)，说明其抗癌活性高于菌丝体多糖。 关键词：桑黄，种性，多糖，抗癌，动物实验 II STUDYONDIFFERENT PHELLINUSlGNIARH?S SIR心s