柑橘采后病害生菌ys-1的筛选和ys-1粗提物的抑菌机理及性质研究.pdfVIP

摘要 摘要 在世界140个国家和地区都种植有柑橘，其中主要集中在中国、美国、 巴西以及地中海沿岸的一些国家，是全球第一大水果。中国的柑橘栽培面积 和产量均占世界首位，是柑橘第一大生产国。在生物技术研究方面，我国紧 跟国际步伐，部分研究还处于领先水平。但在柑橘采后病害的防治研究方面， 我国落后于美国、巴西、西班牙等国，原因主要是起步较晚，重视不够。所 幸的是，随着人们对食品安全意识和环境保护意识的增强，我国正在加强这 方面的力量配备和研究开发力度，期望在未来几年会有所突破。 本文以江西的两大特色柑橘品种一新余蜜橘和南丰蜜橘为试验材料，筛 选到了对柑橘采后危害最为严重的两大真菌性病害(青霉病和绿霉病)抑制 作用强的微生物拮抗菌(命名为YS一1)，并对其离体和活体抑菌效果进行了 研究；为了探讨菌株YS．1的发酵工艺，本文采用单因子和正交设计相结合的 试验方法对菌株YS．1发酵产抗菌物质的培养条件进行了优化；为探索抗菌物 质的分离纯化条件，对菌株YS．1的发酵液预处理条件的选择以及该菌株的抗 菌物质进行了理化特性的研究，以期为后续抗菌物质的分离纯化研究提供理 论基础。本文主要研究结果如下： 1．首先从分离、筛选着手，尝试了从不同途径，如土壤、果表、叶表及 果实伤口处等分离菌株，采用离体初筛和活体复筛的方法，最终从金橘果表 rDNA 筛选到了一株拮抗作用较强的菌株YS．1。经形态学、生理生化、16S brasi尾nsis)，序列登录号为：JQ677085。 2．通过研究菌株Ys．1对柑橘青霉病菌和绿霉病菌的抑制效果，发现离体平 板上，菌株YS．1的菌悬液和上清液都对这两种病原菌表现出拮抗作用，且菌悬 液对绿霉病菌的抑制效果好于上清液，而上清液表现出对青霉病菌有更好的抑 。制效果。在活体上菌株YS．1对青霉病菌的抑制效果，上清液的抑菌效果比菌悬 液的要好，且两者之间有显著差异，上清液处理过的果实发病率仅为33．74％， ITlln。 病斑直径为4．71 3．抑菌机理研究试验发现，菌株YS．1的抑菌机理既可能与营养和空间的竟 摘要 争有关，也与菌体抗生素的分泌有关，菌体本身也产生直接抑菌作用。通过对 菌株YS．1抑菌谱的研究，发现其除了对柑橘青霉病原菌和绿霉病原菌表现出较 强的拮抗作用外，对柑橘采后其它真菌性病害如柑橘炭疽病菌和柑橘酸腐病菌 也有抑制作用，且对柑橘采后细菌性病害如柑橘溃疡病菌也有较强的抑制作用。 4．对菌株YS．1产活性物质的生物效价进行了测定，得出计算生物效价的公 式，并通过单因子试验和正交设计试验相结合的方法获得拮抗菌YS．1产生物活 性物质的最佳培养基配方和发酵最优条件参数。研究结果为：由抑菌圈计算生 酵母提取物2．5％，NaCl 0．2％，K2HP04O．2％；优化后的培养条件 0．6％，MgS04 h；确定了最佳 为接种量4％、发酵温度30℃、发酵初始pHi6．0，培养时间为72 碳源为可溶性淀粉，最佳氮源为酵母提取物。 5．探讨了发酵液的预处理方法，本文通过采用加热法和调酸法对菌株YS．1 的发酵液进行预处理，得出将发酵液的pH调为3．0进行调酸处理，80℃下加热 处理15min为最佳预处理条件。 6．对菌株YS．1的抗菌物质在不同溶剂中的溶解性进行了试验，推测该粗提 物中的抑菌物质是一种极性较大的水溶性物质。 7．本文还对菌株YS．1抗菌物质的稳定性进行了试验研究，发现该物质能耐 高温，耐酸及紫外照射，在121℃下灭菌20 h后 rain，pH为3．0和紫外照射24 抑菌活性均保持较好。对氯仿敏感，低温和常温下耐贮藏。说明菌株YS．1所产 生的抗菌物质有较好