ABCA1胞外第四环缺失突变体的构建及抗砷性的研究.pdf

ABCA1 胞外第四环缺失突变体的构建及其抗砷性研究 摘 要 目的：构建ABCA1 蛋白胞外第四环第1479～1597 位氨基酸残基缺失的突变体。转染HeLa 细胞后 观察其抗砷性变化，推测此突变体可能发挥的功能。 方法：采用重叠区扩增基因拼接法构建 ABCA1 第 1479～1597 位氨基酸残基缺失的突变体基因， 并将其克隆至pcDNA3.1/V5-His/ABCA1 载体上，脂质体法转染HeLa 细胞，激光共聚焦观察突变体 蛋白定位，Cell Counting Kit-8 （CCK-8 ）试剂盒检测其48h 急性砷中毒后生存率的变化，流式细胞 术检测细胞凋亡率的改变，原子荧光吸收光谱法检测细胞内的总砷含量。 结果：该突变体基因经DNA 序列分析表明：具有正确的序列和阅读框。激光共聚焦证实其表达的 蛋白仍然能正确定位在HeLa 细胞的细胞膜上。CCK-8 结果显示转染wild-type ABCA1(WT)质粒和 ABCA1 △1479～1597AA(ABCA1△)质粒的细胞在各种砷浓度下生存率都较空载体对照组(control) 高。随机区组设计的方差分析比较各浓度下三组之间生存率的差异，WT 、ABCA1△与对照组的 P 值均小