一氧化氮在哮喘气道炎症发病中对T淋巴细胞的调控作用.pdf

一氧化氮在哮喘气道炎症发病中对 T淋巴细胞的调控作用 中文摘要 ／支气管哮喘(哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病，肥大细胞、嗜酸性粒细 胞L(Eos)和其他多种炎性细胞均参与厂其发病过程，而近年来大量研究结果 表明T淋巴细胞具有关键性的作用。新近研究表明哮喘患者体内T淋巴细胞过 度活化，尤其CD4+Th2细胞的激活及其分泌的多种细胞因子(如IL一4、IL一5 等)参与哮喘炎症形成，表达这些细胞因子的细胞数量与哮喘病情的严重程度 及气道反应性密切相关。但T淋巴细胞的活化机制尚不十分清楚。一氧化氮(NO) 为重要的细胞内信号传导小分子物质，具有重要的免疫调节作用，可直接参与 多种细胞因子的调节。但有关内、外源性N0与哮喘气道慢性炎症发病中T淋 巴细胞激活关系的研究报道尚少。 细胞凋亡在维护机体内环境中发挥重要作用，凋亡过度或凋亡不足都会引 起细胞数量和功能失衡而导致疾病。近年提出T淋巴细胞凋亡减少可能与某 些自身免疫性疾病的发生有关，但在哮喘气道慢性炎症的发生、持续及消散等 ／ 过程中，T淋巴细胞的凋亡变化规律及凋亡的分子调节机制尚不明确。有关研 究报道尚少见。，一。 有鉴于此6本研究目的即在于阐明内源性NO对哮喘炎症中T淋巴细胞活 化、增殖及细胞因子IL．4、LL．5和ⅣN一表达的作用以及外源性NO对哮喘气 道T淋巴细胞的影响，探讨哮喘T淋巴细胞凋亡变化规律和调节机制及与内 源性NO的关系。 房法： ＼ 本研究采用形态学观察、免疫组化技术、组织及细胞原位杂交、细胞培养 和双抗夹心ELISA等检测方法，用～氧化氮供体(L—Arg)及一氧化氮合酶抑 制剂(L—NAME)作为工具药，对内源性NO对哮喘淋巴细胞增殖、淋巴细胞 能调节进行了研究；观察了致敏大鼠肺组织中NO的变化与活化T淋巴细胞 NO对哮喘大鼠气道浸润的淋巴细胞的影响。采用 的关系：观察了吸入40ppm 37末端标记原位细胞凋亡检测、流式细胞仪、电镜、形态学观察、原位杂交 及免疫组化等方法，观察了哮喘患者淋巴细胞凋亡变化规律及与Bcl—2和Box 基因表达变化的关系；还观察了NO对致敏大鼠Fas抗原表达及支气管肺泡灌 洗液(BALF)中淋巴细胞凋亡的影响。 结果： 1．致敏大鼠支气管粘膜下嗜酸性粒细胞(Eos)、淋巴细胞及raiL．2R阳 性淋巴细胞增多，其脾淋巴细胞增殖及mlL一2R阳性的脾淋巴细胞亦增多。L． 少，体外实验时亦然；L—Arg有使气道Eos、淋巴细胞、mlL一2R阳性细胞进 一步增多的趋势，体外实验证实低剂量L—Arg促进脾淋巴细胞增殖及mll。2R 的表达，而高剂量时作用则相反(均为P0．053。 2．诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA主要表达于致敏大鼠肺泡巨噬细 胞及细支气管上皮细胞，并与肺组织匀浆NO的代谢产物的增高相一致，随着 炎症进展，iNOS mRNA表达增高与气道mIL一2R阳性淋巴细胞数量的增高呈 正相关。 3．致敏小鼠TL一5 mRNA表达明显较正常组增多(P0．01)，主要分布于支 气管周围浸润的炎性细胞，与气道浸润的Eos、淋巴细胞数目的增多呈正相关： mRNA表达增高(均为PO 并使IFN-Y mRNA表达增 05)；L．Arg则使IL一5 高(P0 05)。 mRNA 4．发作期哮喘患者外周血淋巴细胞在植物血凝素(PHA)刺激下IL．4 表达及分泌、IL．5 05)，IFN— mRNA表达及分泌均显著高于正常人(均为P0 YmRNA表达及分泌与正常人无显著差别；L—Arg可促进淋巴细胞IL一4、IL．5 0l、P0 mRNA表达及分泌(PO NAME在中高剂量抑制淋巴细胞EL．4、IL．5