色素亲和反胶团辅助溶菌酶复性研析.pdfVIP

中文摘要 反胶团复性法是目前国内外最为新颖的蛋白质复性方法之一，可见报道有 限，其中除一篇使用的是非离子型反胶团外，其余几篇使用的都是离子型反胶团， 且均未修饰亲和配基。本文利用新型的反胶团一色素亲和反胶团辅助溶菌酶复 性，色素亲和反胶团是一种修饰了亲和配基的非离子型反胶团，是由亲和配基一 85)、 活性色素辛巴蓝(CB)、非离子型表面活性搿一失水山梨醇三油酸酯(Span 有机溶剂正己烷(n-hexane)等在一定条件下反应得到的。 85／n-hexane系统辅助溶菌酶复性的实验方法以及 本文系统研究了CB／Span 85、CB、脲、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷 操作参数的影响，包括Span 胱甘肽(GSH)、溶菌酶的浓度，pH值，反胶团含水率(Wo)，反应时间等。成 功实现了较高浓度(3～3．5 m∥mL)溶菌酶的完全复性，体现出反胶团法较直接 稀释法的巨大优势，以及非离子型亲和反胶团较单纯非离子型反胶团在复性效果 mol／L 方面的较大优势；同时保证95％以上的溶菌酶能够被O．5 MgCl2溶液反萃 回收，且圆二色光谱分析证明了最终所得溶菌酶二级结构的正确性，体现出非离 子型亲和反胶团较离子型反胶团在蛋白质回收方面的较大优势。在此基础上，尝 试改进反胶团性能，如添加助溶剂、助表面活性剂等以期进一步提高复性浓度， 取得了一定的效果。 85／n-hexane系统辅助溶菌酶复性基础上，本文进一步将 在成功实现CB／Span 色素亲和反胶团与人工伴侣，即阳离子型表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB)与争环糊精(p￡D)的联合作用系统，耦合辅助溶菌酶复性。系统研 究了二者耦合作用辅助溶菌酶复性的实验方法以及操作参数的影响，包括脲、 到了优化作用，并使得4m酌nL溶菌酶被完全复性。本文在此基础上还尝试了 使用其它方法与色素亲和反胶团耦合辅助溶菌酶复性，如醇类小分子添加剂等， 也取得了一定成效。 关键词：复性溶菌酶 色素亲和反胶团 非离子型表面活性剂辛巴蓝 人工伴侣 ABSTRACT Anovel methodreversemicelleshasbeen and proteinrefoldingusing developed the for thatusednonioniereVerse olle bynow黜verylimited．Exceptreport reports oftheothersusedreversemicellesformulatedwithionic micelles，all surfaetant,AOT, and咖eofthem this affinity-based coupledafl陆tyligand．Inpaper，aaye—ligand micellarformulated、航th tothe “乳rerse nonionic system surfactant(RMS)wasapplied ofdenatured／reducednonionicsurfaetantofsorbitanIrioleate refolding lysozyme．The