苯丙氨酸乙酯修饰海藻酸钠纳米粒的制备及其应用.pdfVIP

JIIJIII III I III III IIIIIllJ Y1 苯丙氨酸乙酯修饰海藻酸钠纳米粒的制备及应用 摘 要 本论文以苯丙氨酸乙酯为疏水基团，制备了疏水修饰的海藻酸钠．苯丙氨酸 乙酯(SA—PE，SP)耦合物，研究了这种两亲性分子在水溶液中的自组装行为： 究了其在体外的药物缓释效果；以人结肠癌细胞Caco．2为模型细胞，考察了纳米 粒的细胞毒性，并探讨了细胞对纳米粒的摄取机制以及影响因素。 利用EDC和NHS作为交联剂，通过酰胺键共价连接苯丙氨酸乙酯 ester，PE)到海藻酸钠(sodium (L—Phenylalanineethyl alginate，SA)上制备SP 化学耦合物，并改变苯丙氨酸乙酯与海藻酸钠的反应摩尔比制成三种不同取代度 的样品(SPI、SP2、SP3)。利用核磁共振和红外光谱检测证明了产物的结构； 利用元素分析仪测定了产物的取代度，每100个单糖分子约含有3．5．4．7个PE分子； 通过超声法制备SP纳米粒悬液，利用动态激光散射、透射电子显微镜和荧光光 谱技术对纳米粒的理化性质进行了测定，纳米粒的粒径随取代度增加而减小，粒 径分布为226．7—425．3nm，纳米粒近似球形，形态完整；SP纳米粒的临界聚集浓 0．12mg／ml、0．10mg／ml。 以VB2为模式营养物，利用超声法将VB2包被到纳米粒中，制备载药纳米 粒(VB2一SP)。随着加药量的提高，SP纳米粒的包封率降低，载药量提高，SPl 纳米粒的最大载药量为12．76-1．22％；随着取代度的升高，包封率和载药量都有 提高。VB2．SP的缓释通过透析的方法进行研究，48h内SP纳米粒对VB2具有良 好的缓释效果；VB2的释放量受取代度和pH的影响，取代度越高，缓释效果越 营养物质VB2的载体。 利用MTT法测定不同取代度的空白SP纳米粒细胞毒性，并利用荧光酶标仪 与激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)研究Caco．2细胞对于荧光标记SP纳米粒的 细胞无显著毒性，24h后存活率仍在95％以上；细胞对纳米粒的摄取率受取代度、 纳米粒浓度、孵育时间和温度的影响，在高取代度低浓度较长孵育时间条件下， 细胞对纳米粒具有高的摄取率；4h内大约有60％的SP纳米粒被Caco．2细胞摄 取；4。C下细胞对纳米粒的摄取受到抑制；激光共聚焦扫描显微镜结果显示SP 纳米粒能被Caco．2细胞摄取。 关键词：海藻酸钠；疏水修饰；SP纳米粒；缓释；MTT； 一 ■ ■ ● ． ● 严 ． ● ● ■ ● I Onand I I CatI On I CI esbased0n PreparatapP 01-nanopart I I aani Re I ester modi fi edsodi umaI i nate pheny ethy g Abstract Sodium alginate(SA)-phenylalanineethyl were with the preparedphenylalanineethylester(PE)ashydrophobicgroups．The self-assembledbehaviorof inwatersolution the was amphiphile chosenasamodel tofabricatethe SP BE