两株海洋玫瑰杆与其噬菌体之间相互关系的研究.pdf

摘要 摘要 海洋噬菌体是海洋生态系统中丰度最高的一种生物类群，它在控制原核生物 的死亡率，调节微生物群落结构、影响微食物网过程以及参与海洋中碳、氮等元 素的生物地球化学循环中发挥着重要作用。由于噬菌体感染对细菌的生理生化过 程具有十分重要的影响，因此对海洋中某一重要细菌类群的生态动力学过程及其 生态意义进行综合考察与评价时，其周围环境中大量存在的噬菌体与它们之间的 相互作用也是一个不可或缺的重要考察因素。对海洋细菌与噬菌体之间的相互关 系进行研究具有十分重要的生态学意义。本文选择了两株具有重要生态地位的海 denitrificansOChl 洋细菌，即好氧不产氧光合异养细菌Roseobacter 14和玫 DSS-3作为宿主菌，对其敏感性噬菌体进 瑰杆菌属细菌Silicibacterpomeroyi 行了分离与鉴定，并就它们与噬菌体之间的相互关系进行了研究。 株烈性噬菌体RDJL①1，分别从电镜形态、感染周期、宿主范围、核酸和蛋白质 组成等方面对该噬菌体进行了分析和鉴定。电镜观察显示，该噬菌体具有一个等 面体的头部(直径约69nm)和一个长约170nm、宽约9nIlI的尾部，属于病毒 性，表明该噬菌体的衣壳内不含脂类物质。噬菌体RDJLol具有较强的裂解能力， 短时间内即可引起宿主细菌的大量死亡。它感染宿主细菌时，在宿主细胞内的潜 伏期约为80min，宿主菌被裂解时，平均每个细胞约释放203个子代噬菌体粒子。 OChl 14能被其感染。对噬菌体RDJL①1的核酸进行限制性酶切分析后，证实RDJL ①l的基因组是一种双链DNA分子，并且其基因组中存在着某种形式的修饰化 碱基，使得其对一些常见的限制性内切酶具有抗性作用。对该噬茵体的基因组进 行RAPD．PCR扩增，并对扩增产物进行克隆测序后，得到了一段l，65l bp的噬 1与 菌体基因组片段，对该基因组片段序列进行聚类分析后，发现噬菌体RDJLO 另一株海洋噬菌体JL001具有较近的亲源关系。最后，使用SDS—PAGE结合 MALDI—TOF 1的蛋白质组成进行了分析与鉴 MS／MS质谱鉴定技术对噬菌体RDJLo 摘要 定，揭示RDJL①1至少由12种不同的蛋白质所组成，其中4个蛋白为其宿主同 源蛋白，另外的8个蛋白由于在现有的数据库中找不到其同源匹配物，被认为是 目前未知的新蛋白。以我们所知，本文中RDJL①1代表了第一株分离到的好氧不 产氧光合异养菌(Aerobicanoxygenicphototrophicbacteria，AAPB)噬菌体， 为将来人们研究AAPB与其噬菌体之间的相互关系拉开了序幕。 Force 其次，结合使用原子力显微镜成像技术(Atomic Microscopy，AFM) OChll4的 与比较蛋白质组学的方法，我们对噬菌体RDJL①1感染R．denitrificans 整个过程中，宿主菌的动态响应过程及机制进行了研究与探讨。在原位状态下， OChl14在受噬菌体感染 对受感染宿主菌的实时AFM成像揭示了R．denitrificans 的整个过程中其细胞表面形态的动态变化过程，尤为值得一提的是，噬菌体裂解 细菌这一极其短暂的动态过程被以AFM图片的形式追踪记录了下来，这也是原 子力显微镜技术在原位实时地