大白菜端粒相关列的克隆及不同染色体fish标记的建立.pdf

IHHIIllUllllUIIIIIll lllllllI Y21 43683 摘要 重复序列是真核生物基因组的一个重要组成部分，不仅对维持染色体的空间结 构、基因的表达调控、遗传重组等都具有重要作用，而且串联重复的DNA簇往往具 有种属甚至染色体的特异性。因此，克隆和分析重复序列是研究一个真核生物基因组 的有效手段。大白菜(Brassica campestris (Brassica)中最重要的蔬菜作物之一，属二倍体物种。此外，大白菜为小染色体物 种，且非同源染色体形态相似。建立有效的染色体识别方法是进行核型分析和细胞遗 传学研究的重要前提。但目前为止，利用有丝分裂中期染色体，基于rDNA为探针的 FISH核型分析，可把大白菜10条染色体中的6条准确区分出，但仍有4条染色体难 以识别。基于此，本研究以拟南芥重复序列为引物，以大白菜自交系‘85．1’基因组 DNA为模板进行PCR扩增，对大白菜端粒相关序列进行了克隆和测序分析；并以锚 定大白菜不同染色体的BAC克隆为探针，在大白菜中期染色体进行FISH，结合45S rDNA、5S rDNA及着丝粒重复探针的FISH结果，构建了精确识别大白菜不同染色 体的FISH标记核型图。主要研究结果如下： 于大白菜2号染色体的近末端，该序列不仅含有拟南芥类型端粒重复单元，还含有其 他生物的端粒重复单元。 2．5S rDNA探针在大白菜染色体上共检测到了lO个杂交信号，分别位于1—3号、 rDNA探针在大白菜 5号染色体长臂的近着丝点区域和10号染色体的短臂末端；45S 染色体上同样检测到了10个杂交信号，但所位于的染色体及部位有所不同，分别位 于1～5号染色体长臂近着丝点区域。 3．大白菜CentBrl着丝粒重复探针在大白菜中期染色体上共检测到了16个杂交 复探针探针在大白菜10对染色体上共检测到了4个杂交信号，分别位于第2对染色 体长臂近着丝点处和第5对染色体长臂的末端。 4．除A1连锁群外，其他9个连锁群筛出的BAC克隆分别在大白菜9对同源染 色体上各出现了1对杂交信号，确定了大白菜染色体和连锁群的对应关系，其中 记的染色体核型模式图。 关键词：大白菜；端粒相关序列；FISH；BAC克隆；染色体核型 ofTelomere AssociatedandEstablishmentofChromosome Cloning Sequence in FISHMarkersChinese Specific Cabbage Author：LiJiuhuan Major：Olericulture Tutor：Shen Shuxing XuanShuxin of of 100 1，China) (CollegeHorticulture，AgriculturalUniversityHebei，Baoding，07 Abstract