番木瓜类胡萝卜生物合成途径部分酶基因cdna的克隆与分析.pdf

摘要 L．)是热带、亚热带地区广泛种植的果树，是类胡 番木瓜(Caricapapaya 萝卜素的重要植物资源。类胡萝卜素是具有广泛生物功能的一大类重要的植 物色素。本研究以红肉番木瓜‘马来10号’果肉为材料，利用RACE和RT-PCR 技术克隆类胡萝卜素生物合成途径中八氢番茄红素脱氢酶基因(phytoene desaturase，PDS)、(．胡萝卜素脱氢酶基因(．carotenedesaturase，ZDS)和番茄 RT-PCR法分析该途径中八氢番茄红素合成酶基因(phytoenesynthase，PSy)、 PDS、ZDS和LCY-B四基因在果实不同发育时期的表达水平。本研究为阐明 番木瓜果肉颜色形成的分子机理奠定了基础，也在分子水平充实了类胡萝卜 素生物合成的理论研究。 1利用RACE和RT-PCR技术克隆番木瓜PDS基因cDNA全长 利用GenBank己登录的番木瓜川垮基因片段，通过RACE技术获得其5’端 长2202bp，最大开放读码框为l752bp，编码583个氨基酸，预测相对分子量为 651l 列；根据cDNA全长推导氨基酸序列与番茄、温州蜜柑、玉米等高等植物PDS 基因的氨基酸序列进行同源性对比分析并构建系统进化树。 2利用RACE和RT-PCR技术克隆番木瓜ZDS基因eDNA全长 根据GenBank已登录的番木瓜蕊因3’端序列，通过RACE技术获得其 等电点为7．52，5’端有25bp长的非翻译区，37端包含267bp的非编码序列；根据 cDNA全长推导氨基酸序列与温州蜜柑、拟南芥、玉米等高等植物殂坶基因的 氨基酸序列进行同源性分析并构建系统进化树。 3利用RT-PCR技术克隆番木瓜LCY-B基因的ORF 获得其ORF序YlJ(GenBank登录号为FJ599643)茭j1613bp，最大开放读码框为 福建农林大学硕士论文 摘要 长的非翻译区，3’端包含25bpl拘非编码序列；根据eDNA全长推导氨基酸序列 与温州蜜柑、番茄、水仙等高等植物LCY-B基因的氨基酸序列进行同源性分析 并构建系统进化树。 4利用半定量RT-PCR分析番木瓜咫y、PDS、肋s和￡c阳基因的表达 以番木J双Actin基因为阳性对照，检测番木瓜PSY,PDS、刁坶和LCY-B四 基因在果实膨大结束期、果皮破色期、果皮50％转黄期和果皮全黄期四个时 期的表达水平，结果表明四基因在四个时期均有表达，且在果实发育期表达 量都呈先升后降的趋势，说明了这些酶基因在番木瓜类胡萝卜素代谢中不可 缺少。四个酶基因的表达水平基本在同一时期达到最大且在果实成熟后期均 趋于下降，说明它们有着密切的协作关系。 关键词：番木瓜；类胡萝b素；eDNA克隆；八氢番茄红素脱氢酶； ‘．胡萝卜素合成酶；番茄红素p．环化酶 2 Abstract afruit cultivatedin and L．)is crop Papaya(Caricapapaya tropical worldwideandrichincarotenoids．Carotenoidsarealarge sub—tropicalregions classof haveawide of functions．Inthis plantpigments，whichrangebiological cDNA of study,thesequencephytoene carotenoid desaturase(ZDS)andlycopene·p-cyclase(LCY-B)ofbiosynthetic flesh