荔枝ec长期继保持与体胚发生及其蛋白质组学研究.pdf

箍建叁挂太堂亟±堂僮j金室 煎要 摘要 callus)、荔枝转基因抗性胚性愈伤组织 本研究以荔枝胚性愈伤组织(Embryogenic resistant callus)、荔枝转基因原生质体再生的胚性愈伤组织 (Transgenicembryogenic cMlusderivedfrom (Embryogenic transgenicprotoplasts，TPEC)细胞系为材料，将其长期继 代保持，并进行荔枝体胚发生的同步化调控，在前人建立的高频率体胚发生的技术体系上诱 导其体胚发生；通过RAPD和GUS检测，进一步研究荔枝不同类型细胞系的差异及GUS 表达情况；以荔枝TPEC细胞系中的Q81．535为材料，研究其在添加和不添加ZT的条件下 体胚发生过程的蛋白质双向电泳分析；并对荔枝体胚发生过程中相关蛋白进行了质谱鉴定及 其功能分析。主要研究结果如下： 1荔枝不同类型细胞系胚性愈伤组织的长期继代保持及差异 荔枝EC、TREC和TPEC在前人继代保持的基础上，又将其延长保持了3年，并且愈 伤组织仍然呈淡黄色、生长旺盛、颗粒细小且松散，保持着很好的胚胎发生能力。并对部分 荔枝TREC和TPEC不同细胞系的胚性愈伤组织进行了GUS化学组织检测，抗性细胞系 定不表达GUS类型；TPEC不同细胞系中，Q81l、Q81．535细胞系GUS为大量稳定表达 枝不同类型细胞系在外观(形态、色泽)和生长状态上的差异，并对部分荔枝TREC和TPEC 不同细胞系的胚性愈伤组织进行了PAPD分析，其差异不是非常明显。 2荔枝体胚发生过程中总蛋白点数目变化 4．7)在Ettan 使用线性IPG胶条con IPGphorⅢ(GEHealthcare)进行第一向等电聚焦， 600 采用SE Rube标准垂直电泳系统(GE ScannerⅢ(GE Master2DPlatinum 凝胶采用Imagine Healthcare)扫描仪采集图像，在Image 6．0软件(GEHealthcare)上做图像分析。结果表明：荔枝体胚发生过程中总蛋白点数目变 化趋势为先迅速上升，在MS20d升至最高点，后略有下降，再迅速下降，并且蛋白点数目 在MS 30d时降低至最低值，然后又经历一个迅速升高并保持稳定的过程。体胚发生中期， 即从ZT20d-ZT30d其蛋白点数目变化剧烈，经历了先迅速下降后迅速上升的过程。 3荔枝体胚发生过程中总蛋白点等电点(p1)变化 荔枝体胚发生过程中等电点在4．5范围内的蛋白点比例随着不同培养时间和条件变化 并不剧烈，蛋白点比例范围几乎都在10．000／o-20．00％，其比例变化呈现先缓慢降低，后迅速 升高，然后几乎保持稳定，再降低，迅速升高，最后迅速降低。pl值在5石范围内的蛋白点 比例变化呈现先缓慢降低，后迅速升高，再缓慢下降。pI值在6．7范围内的蛋白点比例变化 Ill 呈现先缓慢升高，在MS 20d时达到最高，后迅速下降，然后几乎保持稳定，然后再缓慢下 降，最后上升，总的变化趋势类似‘‘N”。 4荔枝体胚发生过程中总蛋白点分子量(删)变化 在荔枝体胚发生过程中分子量(MW)30l①-45I①的蛋白点变化趋势与分子量(MW) 45KD-66KD的蛋白点变化趋势基本一致，先迅速升高，后降低，再升高，再降低，最后上 升。分子量(MW)20．1KD．30KD的蛋白点变化趋势呈现先快速上升，后略有下降，然后 再上升，基本保持稳定，变化不是非常明显。分子量在14．4KD．20．1KD的蛋白点变化趋势 呈现先升高再降低，然后再升高，在MS40d时达到最大，后又快速下降。分子量在 66KD一97KD范围内的大分子量蛋白点变化趋势先升高，然后略有降低，然后基本保持不变。 5荔枝体胚发生过程中15KD小分子量蛋白点数目变化 在荔枝体胚发生过程中，小分子量蛋白数目基本呈先升高再大幅降低，后略有升高，最 后又大幅下降的