柑橘皮乙醇提取的分离鉴定及其对茶云纹叶枯病病原菌的抑制作用.pdfVIP

摘要 柑橘为柑橘属、芸香科植物。柑橘皮富含有香精油、果胶、黄酮、类柠檬苦素等 生物活性成分，具有抗氧化、抗癌、抑菌、调节免疫、降脂及防治心脑血管疾病等多 重功效，是一种具有很大开发潜力的保健资源。但是其对茶树上病原菌的抑制机理尚 不清楚。基于此，本实验以茶树云纹叶枯病病原菌为指示菌种，对柑橘皮乙醇提取物 中的抑菌物质进行了分离鉴定。 本研究用 95%乙醇对柑橘皮进行超声提取，取部分提取物分别用石油醚、二氯甲 烷、正丁醇进行萃取，得到 4 种萃取物；对部分提取物进行了柱层析分离纯化。测定 了4 种萃取物及其中 5 种化合物的抑菌效果。采用生长速率法测定柑橘皮乙醇提取物 中4 种萃取物对茶云纹叶枯病病原菌的抑制作用，并进行了毒力测验；采用抑菌圈法 测定了分离得到的 5 种化合物对茶云纹叶枯病病原菌的抑制作用。主要结果如下： 1、10g 柑橘皮乙醇提取物浸膏萃取后所获得的四个部位重量分别为石油醚部位 浸膏 8mg，二氯甲烷部位浸膏 11.2mg，正丁醇部位浸膏 200mg ，水部位浸膏 110.4mg。 2 、5g 柑橘皮乙醇提取物浸膏经柱层析分离后得到 5 种主要化合物，经光谱学鉴 定，5 种化合物分别为：5,6,7,8,4’-五甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黄酮、 川陈皮素、5,6,7,3’,4’-五甲氧基黄酮及柠檬苦素。 3、柑橘皮乙醇提取物的石油醚部位浓度为 0.8mg/ml 时，其对茶云纹叶枯病病原 菌的抑制率达 80.9%，EC50 为 0.1638mg/mL ；二氯甲烷部位浓度为 1.12mg/ml 时，其 对茶云纹叶枯病病原菌的抑制率为 60.6%，EC50 为 0.7643mg/mL 。 4 、当供试浓度为 1000ug/ml 时，柑橘皮乙醇提取物 5 种化合物中 5-羟基 -6,7,8,3’,4’-五甲氧基黄酮和柠檬苦素对茶云纹叶枯病原菌有很好的抑制作用，抑菌直 径分别达 13.47mm 和 16.05mm。 关键词：柑橘皮，茶云纹叶枯病，抑菌作用，化合物 I Abstract Citrus belongs to Rutaceae Citrus. Citrus peel has great potential for development of health-care resources, which is rich of essential oil, pectin, flavones, limonin and etc. Citrus has the function of antioxidant、anticancer、antibacterial、modulating the immune system、reduced-fat and preventing cardio-cerebrovascular disease. However, the research mechanism of the antibacterial activity to pathogens of tea tree is unknown. Therefore, the ethanol extraction of citrus peel was isolated by bioactivity-guided with Colletotrichum camelliae Massee as indicator. Citrus peel was extracted with 95% ethanol by ultrasound. Four kinds of extracts were obtained that a portion of the extraction was extracted with petroleum ether, dichloromethane, n-butanol. The ethanol extraction of citrus peel was isolated by column chromatography.