棉花植株再生和杆菌介导的Enhancer trap遗传转化.pdfVIP

摘要 棉花是我国最重要的经济作物之一，也是我国受虫害影响最严重的农作物之一。 利用遗传工程技术改良棉花品种能够提高棉花的种植效益，然而目前棉花的生物技 术的发展仍然存在着很多问题，主要表现在棉花遗传转化周期长、导致再生植株的 体细胞变异很严重，棉花体细胞胚胎发生对基因型依赖性很强等等。这些问题已经 成为棉花生物技术、棉花功能基因的验证和棉花相关基因克隆等研究领域的障碍和 瓶颈。 测不同Enhancertrap系中报告基因的表达模式来发掘新基因及其调节序列。 本研究通过建立高效棉花遗传转化体系，采用农杆菌介导的转基因方法，旨在 创建棉花T-DNA插入的Enhancer-trap突变系。主要研究结果如下： 1为了提高棉花遗传转化效率，针对转化过程中的一些重要影响因素，如菌株、 AS、菌液浓度、共培养时间等做了一系列分析实验。实验结果显示：农杆菌浓度 培养温度19℃，暗培养48小时，能够获得较高的转化效率；不同菌株对棉花品种 传转化。 浓度的降低，愈伤块发绿、变硬、不利于愈伤分化成胚性愈伤。 3通过体细胞胚胎发生与农杆菌介导的遗传转化方法，获得了转基因棉花YZl 功将目的基因片断转入到棉花基因组中并成功表达。 4报告基因(gusgcne)在抗性愈伤、胚性愈伤、幼胚和再生植株根部均能表 达，经组织化学染色，在愈伤组织中GUS基因表达频率达到49．3％。 关键词：陆地棉；体细胞胚胎发生；植株再生； 传转化；gus基因 Abstract hirsutumL、isoneofthemost economic Upland important crops． cotton(Gossypium Genetic rolesinfurther fiber of engineeringplaysimportant improvingyield,quality contentand the and boththe fiber,oil increasingproductionefficiencyreducingmonetary and excellentcottoneultivarshavebeen environmentalcostof many production，and in since hindersstillexistcotton developedthrough1987．Howevermany biotochnology． in and Themain thatit is difficultsomatic reasonis extremely embryogenesis transformation．Recalcitrantcotton tissue regenerationduringgenetic cultivars，long culture oftissue a of duration,the culture，anddegree unpredictability high