cs-acs1基因对黄瓜性型分化的影响.pdfVIP

摘 要 Cs-ACSl转基因对黄瓜性型分化的影响 蔬菜学专业硕士研究生 曲淑娟 指导教师 张兴国研究员 (摘要) 选育全雌或强雌性黄瓜品种是黄瓜育种主要工作目标之一。黄瓜雌花节位出现早、数量 多，分布均，是黄瓜早熟、高产、稳产的基础。目前，已明确黄瓜的性别分化除受主控基因 影响外，还受多种因素制约，其中内源乙烯是重要影响因素之一。许多研究者认为黄瓜ACC 合成酶基因与控制雌性的，位点紧密连锁。其中，Cs-ACSl基因与，基因同源性极高，早期 被误认为就是，基因。可见，黄瓜Cs-ACSl基因与黄瓜雌性分化存在相关性。为了验证Cs-ACSl 基因对转基因黄瓜性型分化的影响，本试验采用PCR方法，从全雌系黄瓜0401基因组DNA 中扩增出2333 bp的基因片段，构建成正义、反义基因表达载体以及由该基因启动子控制红色 荧光蛋白报告基因的表达载体，并将上述三种植物表达载体的目的基因导入黄瓜，通过对转 基因植株的观察、分析，证实Cs-ACSl基因与黄瓜雌性性别分化密切相关。本试验主要研究 内容及研究结果如下： 1．克隆了Cs-ACSl基因 仅有1个碱基的差异，核苷酸序列同源性为98％，而推导编码的247个氨基酸完全一致。上 述结果表明：所克隆的基因为Cs-ACSl基因。 2．CsoACSl正义基因导入黄瓜后发生共抑制，导致转基因黄瓜植株雄性化 繁育品种)中。移栽后共获得12株成活转基因黄瓜植株，PCR检测初步确定Cs-ACSl正义基 因已转入黄瓜基因组中；通过对成活植株的表型观察，发现12株转基因黄瓜植株有10株全 部开雄花，而且全部植株的项芽也为雄花，表明Cs-ACSl基因与强雌黄瓜体内的Cs-AC$1基 因相互抑制，限制自身Cs-ACSl基因表达，同时也限制转入Cs-ACSl基因表达，即出现共抑 制现象。 3．Cs-ACSl反义基因能导致转基因黄瓜植株雄性化 正义植物表达载体pVCT2214经限制内切酶酶切后，获得反义植物表达载体pVCT2215。 两南大学硕十论文 经检测，确定该载体构建成功后，采用农杆菌介导法将Cs-AC$1反义基因转入强雌系黄瓜0837 中。移栽后，该转基因黄瓜共成活2株，对成活的转基因黄瓜检测(PCR)，确定Cs-AC$1反 义基因已转入黄瓜基因组中；观察成活2株反义转基因黄瓜，发现植株全部开雄花，而且全 部植株的顶芽也为雄花，推测发生反义抑制的作用。 4．Cs-AC$1-REF基因可在转基因黄瓜的花芽中表达 确定转CsACSl-REF基因已转入黄瓜基因组中。进行一周白化处理后，荧光显微镜观察检测， 芽中表达。 关键词：黄瓜；o卅∞，基因；’正义表达载体；反义表达载体；转基因；性别分化 II ABSTRACT Effectsof onSex Cs-ACSl Transgene DifferentiationofCucumber Candidateuan ShujQu Advisor XingguoZhang 一一 一 AB STRACT and breedisoneofthemain incucumber subgynoe Gynoee purpose breeding．Theappearing anddistributionof isa