棉花遗传转化方与耐盐、抗除草剂基因的转化利用研究.pdfVIP

缩略词表 Tableofabbreviation T3， 致谢 本论文是在导师祝水会教授悉心指导下完成的。从论文选题、试验分析、数扼处理 到论文的写作和定稿，导师无不倾注了大量的心血和精力。导师渊博的知识、严谨的治 学，奁度、忘我的工作精神以及丌放宽容的胸怀将永远是我工作、生活、学习的榜样。在 此论文完成之际，谨向导师血年多来对我学业上的谆谆教诲和生活上的关心照顾致以最 崇高的敬意和最衷心的感谢! 感谢农学系的张国平教授、薛庆中教授、石春海教授、胡晋教授和王学德教授．您 们精彩的授课让我领略到农学知识海洋的浩瀚；感谢农学系张宪银老师的热心指导和洪 彩霞老师在试验和生活中的热情帮助；试验的顺利完成，特别感谢本实验室的卢德照、 任爱霞、胡月艳、栾启富、丁亮、高燕会、Reddy、章旭宏、金奎英、吕有军、孙玉强、 吴玉香，张新友、孔广超、汪静儿、刘芦苇、林君、Daud、秦丽、沈小佳等的热心帮助 和鼓励，在这个充满团结和竞争氛围的集体罩学习和生活，是我的荣幸；感谢我的朋友 倪西源、刘海琳、会亮、张小全、朱云国、王建成、蒋培东、王笑、张颖等给予的无私 帮助，你们的友谊让我的研究生活充满了温暖和欢笑：感谢马姐在阳fsJ实验中对我的照 顾和帮助，你豁达乐观的念度让我受益匪浅。 感谢我的父母及所有家人在我漫长的求学生涯中无私地给予我物质上的资助和精 神上的支持，真的非常感谢您们! 作者谨于卷首向所有关心和帮助过本研究工作的领导、老师、同学、朋友及家人表 示最衷心的感谢!同时向参加本论文评阅、评议及答辩委员会的全体专家、教授致以最 诚挚的谢意! 蒋玉蓉 00六年十一月于浙江大学华家池校区 棉花遗传转化方法与耐盐、抗除草剂基因 的转化利用研究 摘 要 棉花是一种重要的经济作物，基因工程技术对于提高棉花的产量、增强抗逆能力和改良 纤维品质具有重要的作用。目前用于棉花的转基因系统主要有载体转化系统、DNA直接导 入系统和种质转化系统等。种质转化系统(germ 过程转化外源基因，无需经过细培而直接得到转化种子。本文结合农杆菌介导法和花粉管通 道法的优点，创建了一种花粉转介外源基冈转化的新方法一花粉粒农杆菌转染法，并与棉花 的其它转化方法一子房注射质粒DNA、农杆菌介导柱头点滴法和顶端分生组织农杆菌介导 法等迸行了分析比较，对四种方法的转化效率和转基冈植株的遗传特性进行研究；同时．利 用获得的转bar基冈抗除草荆棉花种质系为亲本进行杂种优势利用及杂种纯度控制的研究． 创建出～套可控制田间纯度的杂交棉制种新技术。此外，本研究还通过花粉管通道法将山菠 菜BADH基因和拟南芥的AtNHXI基因导入棉花，创造耐盐能力得到较大提高的转基冈耐 盐棉花种质材料。主要研究结果如r： 1．棉花花粉粒农杆菌转染技术的研制 花粉农杆菌感染法是通过农杆曲和花粉共培养，再利用自身的花粉管授粉途径转化外源 基因的一种新的棉花遗传转化方法。将携带有目的基冈质粒pCB4的农杆菌菌株LBA4404 与陆地棉新鲜花粉粒共培养丁．花粉萌发培养基中进行转染，质粒载体pcB4中包括标记基因 检测，验证了bar基闲的整合和表达。并对转基闪棉种质的外源基因遗传特点和对农艺和经 济性状的影响进行了研究。结果表明，该方法的转化率达5．5％，显著高丁．花粉管通道法。 分子检测和遗传分析结果表明，外源基因在转基因植株中均为单拷贝，符合典犁的孟德尔分 离规律，外源基冈的整合对丁转基因棉的农艺性状和经济性状无显著的影响，是一种具有较 好利_}Ij价值的棉花外源基冈转化方法。 2．棉花外源基因转化方法的比较 采用包括本研究建立的棉花农杆菌花粉粒介导技术在内的多种外源墓冈转化方法，_Ilj携 转化效果和外源基因的遗传特点。结果表明，子房注射质粒DNA(方法I，普通的花粉管通 道法)、花粉粒农杆菌转染法(方法11)、农杆菌介导棒头点滴法(方法111)和顶端分生组 织农杆菌介导法(方法IV)均获得了具有外源墓冈表达的转化植株。叶片除草荆Basra抗性 鉴定、PCR检测和Southern尔交证实了bar基内已经整合剑植物基冈纽中。然而，各种方 法的转化率，所需要的转化时间以及方法