流体切应力对中粒细胞-内皮细胞黏附的影响及其机制探讨.pdfVIP

流体切应力对中性粒细胞一内皮细胞猫附的影响及其机制探讨 流体切应力对中性粒细胞一内皮细胞薪附的影响及其机制探讨 研究生 唐戎 导 师 陈槐卿 教授 四川大学 华西医学中心 生物医学工程研究室 摘要 目的 探讨人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcells, HUVECs)在流体切应力作用下白细胞介素一8(interleukin-8，工L-8)的生 成以及切应力的作用时间和作用强度对工L-8生成影响的变化规律;阐明 流体切应力通过调节血管内皮细胞表达 工L-8对中性粒细胞一内皮细胞钻 附的影响及其强度依赖性的变化规律;探讨流体切应力影响中性粒细胞- 内皮细胞薪附的可能机制。 方法 1〔)用低强度的流体切应力 ((2.09,4.61,6.19dyne/cm2)处理 培养的人脐静脉内皮细胞，作用时间为 lh,2h.3h.4h.5h,6h,8h 、IOh.12h，以未做任何处理的人脐静脉内皮细胞作为阴性对照。然后 采用双抗体夹心ABC-ELISA技术检测内皮细胞IL-8蛋白质的生成;(2) 用不同强度的流体切应力 (2.09,4.61,6.19,8.51,10.50,12.59,14.41, 17.22,18.32dyne/cm2)处理培养的人脐静脉内皮细胞，作用时间为5h 、6h，以未做任何处理的人脐静脉内皮细胞作为阴性对照。然后采用双 抗体夹心ABC-ELISA技术检测内皮细胞IL-8蛋白质的生成;(3)用不 同强度的流体切应力 (2.09,8.51,12.59,18.32dyne/cm2)处理培养的 人脐静脉内皮细胞5h.6h，然后用灌流液激活人外周血中性粒细胞后， 观察中性粒细胞与内皮细胞的薪附情况;(4)用不同强度的流体切应力 (2.09,8.51,12.59,18.32dyne/cm2)处理培养的人脐静脉内皮细胞， 然后用灌流液激活人外周血中性粒细胞后，流式细胞仪测定中性粒细胞 流体切应力对中性粒细胞一内皮细胞猫附的影响及其机制探讨 表面 CDlla/CD18(LFA-1),CDllb/CD18(Mac-1)的表达量;(5)用抗 -LFA-1、抗Mac-1的单克隆抗体、Ca2+拮抗剂处理中性粒细胞后，观察 其与切应力处理过的内皮细胞的豁附情况。 结果 (1)未用切应力处理的HUVECsIL-8蛋白质有低水平的基础表达; 加载切应力(2.0.19dyne/cm2)作用lh后即明显增加，和静态 对照组相比，分别增加了3.1,倍;作用 5h后 IL-8蛋白质表 达量至最高值，与静态对照组相比，分别增加了,106.2. 与 1h组相比，分别增加了.33.2倍;作用 8h后 IL-8蛋白 质表达量开始下降，和 5h组的生成量相比，分别下降了32%.13%. 35%;作用10h后IL-8蛋白质维持在了一个较稳定的水平，和Sh组的 生成量相比，分别下降了51%.31%.34%，但与静态对照组相比，分 别增加了81.7,97.69.4倍。各实验组(2.0.19dyne/cm2)均 表现出相同的IL-8蛋白质随时间的变化规律，即切应力作用HUVEC1h 后，IL-8蛋白质表达迅速增加，至5h达到峰值，8h时下降，10h后 IL-8蛋白质维持在一个较高的水平。(2)未用切应力处理的内皮细胞只 有极少量的IL-8蛋白质生成;切应力处理内皮细胞后，低切应力 ((2.09 dyne/cm2)时IL-8蛋白质生成量明显增加，为高切应力(18.32dyne/cm2) 时IL-8蛋白质生成量的约6(作用5h)或7倍 (作用6h)。IL-8蛋白 质生成量与内皮细胞所施加的切应力强度呈反变关系;直线回归方程:5 h时为y=760.12-36.06x，相关系数y=-0.978;6h时为y=781.87 -36.66x，相关系数y=--0.980。式中:y为切应力作用下内皮细胞IL-8 的生成量;x为施加于内皮细胞的切应力强度 (dyne/cm2)。不同的切应 力作用时间 (5h.6h)均表现出相同的IL-8蛋白质生成量随切应力强度 的变化规律。(3)未用流体切应力处理的内皮细胞，中性粒细胞只有极 少量的茹附;2.09dyne/cm2切应力处理内皮细胞5h或6h后，用灌流液