木质素合成调控其与甘蓝型油菜抗菌核病和抗倒伏性关系研究.pdfVIP

摘 要 菌核病和倒伏是影响我国油菜生产的两个重要因素，不仅严重降低了油菜的产量，同时也影 响了菜籽的品质和收获指数。在生产中这两个因素又表现出相互促进的作用，因而给油菜生产带 来了更大的危害。栽培措施的改进和化学农药的使用虽然可以缓减这些因素的影响，但效果有限， 且化学农药还会造成环境污染。传统育种和转伽、几丁质酶基因、B一1，3一葡聚糖酶基因等虽 然可以在一定程度上提高油菜抗菌核病的能力，但由于缺乏有效的抗源材料，油菜抗菌核病育种 一直未取得实质性进展。而国内外对作物抗倒伏性研究也仅处于描述性研究阶段。因此，探索新 的方法以提高油菜及其它作物的抗病性和抗倒伏性具有重要的意义。 木质素作为植物机械组织和细胞壁的重要组成部分，对于增强植物抵御各种逆境(风、雨、 ligase，4一cL)处于代谢分支点的位置，引导着光合代谢产物向术质索合成途径的流动，被认为 是调控木质素合成的理想靶基因。本文首先分析了不同油菜材料木质素含量及其与油菜抗菌核病 和抗倒伏性之间的相关关系，为利用基因工程技术提高油菜木质素含量，增强其抗菌核病和抗倒 伏能力提供依据。利用同源序列法从毛白杨中分离4一∞基因，并对其生化功能进行验证，进而 通过异源4吼基因在甘蓝型油菜(Bras豇ca n印us)中的过量表达，研究“L活性水平的调控 对油菜木质素含量及抗菌核病和抗倒伏能力的影响，为油菜高产、优质、抗逆育种奠定基础，并 为作物抗病和抗倒伏研究及育种提供新的思路和方法。本文的另一个研究内容是选用特异抗菌核 病、抗倒伏和特异不抗菌核病、不抗倒伏的油菜材料配制杂交组合，利用共显性标记ssR和基于 功能基因外显子的sRAP标记对甘蓝型油菜抗菌核病和抗倒伏性进行QTL定位研究，筛选对油菜 抗菌核病和抗倒伏性状具有显著作用的QTL位点，为下一步qTLs的分离和基因聚合创造条件。 本研究获得主要如下结果： 1． 分析了29个油菜材料茎杆木质素含量与抗菌核病和茎杆强度之间的相关关系，其相关系数 分别为0．6971和O．618，表明木质素含量与油菜抗菌核病和抗倒伏之间存在显著正相关性。 2． 从毛白杨木质化茎中分离了一个4—血cDNA，序列分析表明，该cDNA包含翻译起始密码子和终 止密码子及完整的编码框序列(oRF)。推导氨基酸序列分析表明，该cDNA编码蛋白序列中包 含所有已知4一cL蛋白的两个特征序列box 表明，该蛋白为classI 4一CL蛋白，且在进化上与白杨(Pop“Ⅱstrem们o』des)中参与木质 素合成的4一CLl(AF041049)最为相近。 3． e)标签的4一cL 构建了原核表达载体pETL，利用Ecojj表达了含N-末端多聚组氨酸(Hisx 重组蛋白。活性分析表明，所表达的重组蛋白具有生物学活性，能够催化参与木质素合成的 4． sx 利用Ni2^亲和柱纯化了带His标签的4一cL重组蛋白，以纯化蛋白作为抗原，制备4一CL抗 血清，为下一步转基因植株的westernblotting检测奠定基础。 5． Abstract j尼加坊?妇sc彪加疗Dr甜mand aretwo f．actorS oilseed in 10dging importantaa’ecting rapeproduction not decreaseoilseed alsoreducethe Ofthe oiland China．Theyonly yield，but qualitiesprocessed haⅣeSt in areworsened index，and a mechanismbetweenthemwhich practicet}lings bysyne唱ic might oilseed