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花脸蘑菌丝生物学特性及其 胞外酶活性的研究 蔬菜专业硕士研究生: 申慧彦 指 导 教 师: 刘朝贵 摘.要 花脸蘑[Lepistosordida_(Fr.)Sing]为伞菌目(Agaricales)，口蘑科(Tricholomateeae), 香蘑属 ((Lepista)的一种野生腐生菌。在我国，野生花脸蘑广泛的分布在云南、四川、新疆、 西藏、贵州和福建等地区，但花脸蘑在野生状态下，数量少，产量低，十分珍贵。其色泽美 丽，气味浓香，味道鲜美，营养价值和医疗价值极高，是珍稀优质的野生食用菌。目前对花 脸蘑的研究甚少，仅对其野生资源进行了调查，初步研究了花脸蘑的生物学习性以及驯化栽 培，但关于花脸蘑生物降解的研究以及大规模人工栽培的报道尚未发现。 本论文从应用基础出发，对花脸蘑形态特征和生活史初次进行了较为系统的研究以及对 菌丝体生长的营养和环境条件做了详细的试验，较系统的了解花脸蘑的生物学特性:从研究 不同培养基和不同生长阶段的花脸蘑胞外酶活性入手，了解花脸蘑对不同培养基质的降解能 力和不同生长阶段对培养料的需求。以期为进一步研究花脸蘑的生理生化奠定理论基础和开 发驯化花脸蘑提供科学依据。本试验做了如下研究: 花脸蘑菌丝生物学特性的研究 试验 1花脸蘑形态特征和生活史的研究 从分类学角度来说所有食用菌的宏观特征都是对它们自身进行分类鉴定的重要依据之 一，通过对花脸蘑子实体、抱子印、抱子和菌丝体的观察详尽了解花脸蘑的形态特征以确立 花脸蘑在植物学的分类地位，并通过借鉴同科的其它食用菌生活史以模拟花脸蘑生活史。 试验2花脸蘑菌丝生长特性的研究 本试验通过采用固体培养对花脸蘑母种培养基进行筛选，从供试的五种培养基中选出最 适培养基为综合PDA培养基，其次为小麦培养基。采用固体平板法对花脸蘑菌丝生长各个因 一一-一一杯 ‘一一-一一杯漂翻黔 - 子进行优化，结果表明:花脸蘑菌丝生长有很宽的碳源谱，生长最适碳源为蔗糖，其次为淀 粉:最适氮源为有机氮，酵母膏优于蛋白陈，无机氮源中硝态氮和铰态氮之间也有显著差异: 菌丝生一长适宜温度为251C,PH值为6.51碳氮比为20:卜60:1。并根据单因子试验采用止交 试验设计对碳源、氮源、pH值进行了正交试验，结果表明碳源为蔗糖、氮源为酵母、pH值为 了的组合菌丝生长最好。液体摇瓶培养当碳源为蔗糖时生物量最高，蔗糖浓度以5%时生物量 最高，菌丝球的大小与糖类物质的利用率无必然联系。正交试验表明以碳源为蔗糖、氮源为 蛋白陈、pH值为7的组合生物量最高。 花脸蘑菌丝胞外酶活性的研究 试验3不同碳源处理对花脸蘑菌丝胞外酶活性的影响 - 采用液体摇瓶试验测得花脸蘑菌丝生长时可以产生多种胞外酶:淀粉酶、纤维素酶，半 纤维素酶、漆酶、过氧化物酶、愈创木酚酶，它们的酶活性不但和菌丝生物量有联系，还与 反应底物 (不同碳源)有关;反应底物 (蔗糖)一致时，随着蔗糖浓度升高，各种酶活性升 高，当蔗糖浓度为2%时各种酶活不再增加，但保持在较高水平，花脸蘑胞外酶活性对碳源蔗 糖的饱和浓度为2%。 试验A不同培养基对花脸蘑栽培种胞外酶活性的影响 本试验对六种培养基上的花脸蘑八种胞外酶:梭甲基纤维素酶、微晶纤维素酶、半纤维 素酶、淀粉酶、漆酶、多酚氧化酶、愈创木酚酶和过氧化物酶活性进行测试，结果表明酶活 性的动态变化与培养基的成分有必然的联系。同一酶系中菌丝所处的营养环境对酶活性大小 的影响造成差异，并不影响酶活性的变化趋势。不同培养基对各种酶活性大小影响程度没有 一致性，这可能是六种培养基中各种酶作用的底物含量不同的原因。花脸蘑栽培种供试培养 基中，以粪草培养基菌丝生长速度最快，生长势好，菌丝颜色为淡紫色。从这六种培养基菌 丝生L看花脸蘑为好气性真菌，当碳源为淀粉、半纤维素、纤维素时较易利用，对木质素的 分解利用能力较差。 试验5花脸蘑栽培过程中酶活性的变化 本试验从栽培种定植起到出现菇蕾结束，每隔五天取样，测其梭甲蒸纤维素酶、半纤维 索酶、淀粉酶、漆酶、多酚氧化酶、愈创木酚酶和过氧化物酶活性。试验结果表明:在花脸 蘑城