苜蓿青贮接种菌合系的构建及其在青贮过程中的作用机理.pdfVIP

摘要 sativa￡F简称苜蓿)是我国第一大栽培牧草，重要的饲料蛋白源，目 紫花苜蓿(Medicago 前栽培面积约为280万hm2。青贮是保存苜蓿鲜度和营养的好方法。但苜蓿蛋白质含量高，糖含 量低，青贮易失败。解决高效、低成本的苜蓿青贮技术对我国畜牧业的稳定发展和确保粮食安全 具有重要意义。乳酸菌作为接种剂一直得到重视，但纯培养菌接种到未灭菌材料后效果不稳定， 学术界一直对此有争论。冈此本研究的目的是摆脱传统的纯培养，优化组合包括难培养微生物种 在内的自然界多样的微生物，构建高效、稳定而抗逆性强的乳酸菌复合系，进而结台传统技术和 现代分子生态学技术研究复合系对菖蓿青贮的促进效果及苜蓿发酵中的作用机理，以期为苜蓿青 贮难题的解决和我国优质、高效青贮苗剂的开发提供理论依据和技术基础。本研究以pH降低迅 速、稳定和L(+)一乳酸积累培多为指标，通过连续的限制性培养，从发酵饲料、青贮苜蓿及乳 态稳定；经GEMS测定结果，发酵液中含有较高的乙酸、乳酸，还有少量甲酸、丙酸等挥发性脂 肪酸及丁二醇、乙酸乙酯、异J鲒、乙醛、乙酰胺等风味物质；在上述代谢产物中乙酸和乳酸占 总代谢物的98％以上，尤其姓Lf+)一乳酸的比率高达60--70％。用传统的纯化培养技术、变性 梯度凝胶电泳(DGGE)以及16SrDNA克隆文库等分子生态学技术相结合分析了A12、Ru2这2 组菌系的组成多样性，结果由A12复合系检测山7株乳酸杆菌，其中3株可培养，4株未能分离； Ru2复合系由2种可培养，1种未能分离的乳杆菌组成。通过16SrDNA的DGGE和克隆文库分 析证明，A12中的优势菌为Lactobacillus kimchii，Ru2中的优势菌为 plantarum和Lactobacillus casei。将A12和Ru2复合系接种到苜蓿的发酵实验证明． Lactobacillusplantarum年¨Lactobacillus F降．提高乳酸含量，降低氨态氨的产生而明显改善青贮 2复合系均能比不接菌对照明显加快pH 饲料的发酵品质：追踪接种卣样的DGGE图谱显示，复合系中的主要菌株稳定定殖在发酵物中成 为优势菌，接种处理显著抑制杂菌繁殖。进一步将A12复台系、各分离单一菌株和分离菌株的人 工组合接种到苜蓿的比较实验显示，箨分离菌株及人工组合在促进pH值降低，提高乳酸生成， 降低氨态氮和抑制杂菌方面的效果不如复合系，证明了无灭菌环境中复合系接菌效果具有优越性。 关键词： 苜蓿，青贮，接种，乳酸茁复合系，分子生态学技术，微生物多样性 Abstract L(Alfalfa)is in area sativa themost importantgrassChina．Nowadays，planting Medicago forage a to alfalfafresh ofalfalfaisabout2．8million is and goodway nutrition．However, hm2．Silage preserve alfatfaiSode difficult toensile iks．10Wfermentable content ofthemost forages becauseof carbohydrate and andlow foralfalfahas