酶解虾壳蛋白制ace抑制肽及抗氧化肽.pdfVIP

摘 要 随着我国水产养殖业的迅猛发展，到2010年，我国对虾总产量已突破350 万吨。虾壳作为虾仁加工副产品被大量剩下，若不及时处理，会造成环境污染， 同时也是资源的一种浪费。通过提取虾壳中蛋白质并对其功能性质进行研究，利 用蛋白酶酶解虾壳制备ACE抑制肽和抗氧化肽，为虾壳蛋白作为食品添加剂和 功能性食品提供了理论依据，为提高虾壳加工附加值提供思路。具体研究内容如 下： 甲壳素17．91％。虾壳中蛋白含量较高且脂肪含量低，且通过氨基酸分析，虾壳 中氨基酸含量丰富，疏水性氨基酸含量占总氨基酸的25．89％，具备制备ACE抑 制肽和抗氧化肽的基本条件。利用碱提酸沉法从虾壳中提取蛋白质，对于其溶解 性、持水性、持油性、起泡性、乳化性和密度等功能性质进行研究。采用Osborne 法分级制备虾壳蛋白，虾壳中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白比例为15：2：1：7． 通过SDS．PAGE电泳分析，虾壳中主要蛋白分子量为13804Da。 本文对ACE抑制肽构效进行分析，通过现有已发表的ACE抑制肽的部分参 数进行数据整合处理，从中找出影响ACE抑制肽活性的有效因素，并揭示其与 ACE抑制活性之间关系，为ACE抑制肽酶解和合成提供理论参考。当氨基酸残 基较少时，ACE抑制肽具有较高活性。ACE抑制肽活性与残基个数和平均疏水 性非常显著相关，与c端的疏水性显著相关。将上述3个参数进行主成分分析， 主成分I和主成分II能够描述所选指标91．65％，并且其与ACE抑制活性关系明 确，呈正相关，相关系数为O．3462． 本文研究了酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的工艺。以虾壳蛋白为原料，选 用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对其进行水解。以单酶水 解产物ACE抑制率和水解度为评价指标，确定了中性蛋白酶和碱性蛋白酶为目 标酶。通过单因素实验和正交实验，确定了这2种酶的最适水解条件：中性蛋白 性．利用凝胶层析分离中性蛋白酶和碱性蛋白酶分子量小于5000Da酶解产物， 中性蛋白酶酶解产物分离得到5个峰，前4个峰分子量分别为794．88Da、 个氨基酸短肽。 在本研究中首次对虾壳蛋白酶解产物的抗氧化活性进行了探索。以虾壳蛋白 为原料，选用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解。以DPPH自 由基清除率和FRAP还原能力为评价指标，选择碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶为目标 酶，通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺，确定酶解条件为：木瓜蛋白酶温 当碱性蛋白酶底物质量分数温度50。C，pH10，酶用量3500u／g，底物质量分数 00mL，反应时间2．5h，FRAP还原力为1．501nmol／mL。 为6．59／1 关键词：虾壳蛋白、功能性质，ACE抑制肽、抗氧化肽 Abstract the and ·With of marine rapiddevelopmentaquacultureindustry fishingindustry, 10 tons．Ifthese to20 hasexceeded3．5million up year,theshrimpproduction are and notdealtwith willcauseenvironment time，it by—production by pollution waste．It anew toincreasethevalueof shellanda resource providesway shrimp basisasfoodaddit