龙眼体细胞胚胎生过程中的基因差别表达.pdfVIP

摘 要 摘 要 煳日版性愈伤组织的体细胞胚胎发生与合子Hl的发育过程基本相同，依次经过愈伤卦侄只、 球形胚、心形胚、鱼雷艇、和}_胚以及成熟胚等阶段。通过对2，4-D浓度及生艮发育时间 的控制获得了高度同步化的备发育阶段体胚材料。 采用SDS法、CrAB法、LiCl沉淀法均可从j明51』}I性培养物提取高质量的DNA。Lia 沉淀法简便、快捷、经济且提取的DNA较前两者质鼙更高，是适合Ⅲ1_舾H生培养物DNA提 取的一种方法。采瑚RNA抽提试刺盒提取的RNA适合mRNA筹划显示分析。 本}趱首次建立了龙H刚砒培养物的mRNA差*Ⅱ显示技术，并：利埘此技术对龙限体细胞 胚胎发生格们生稃中的mRNA变化进行分析，结果获得了30条差异eDNA片段，经Northern 其中Ionganl在煳R体胚的胚性愈伤组缆和球形胚阶段表达：longan2为组成型表达，即存在 丁整个体胚发生过程中：longan3在球形胚和鱼雷形胚阶段特异表达；longan4、longan4’在 子叶形胚阶段特异表达。 分别在5’端存在～个开放阅读框，Ionganl在3’方向，longan2、Iongcm3在5’方向均没有 终f}密码f，所以可能往相应的方向延伸仍为各自的ORF，冈此可以通过RACE或者筛选 eDNA文库的办法米获得它们的全氏eDNA。登陆Genl：蛐Ik进行同源眭比较发现longaH2、 (92％)，推测longanl可能是龙眼体细胞胚胎中存在的apx基冈。 龙眼体细胞胚胎发生过程中不仅mRNA的种类和数链存在明显变化，而且蛋向质的种类 和数龄也存在显并变化。采Hj蛋白质水平般向电泳技术研究龙眼体胚发生过程中的蛋白质变 化，获得13个特异蛋白；分析发现这些特异篮向的等电点与龙眼体细胞胚胎发育进程相关， 随着发育进科的推进，特异蛋自的等电点节州氐趋势。推测龙眼体胚的发育与特异蛋白的酸 碱性相关。 分析mRNA著别显示的结果平|嗤白质烈向电泳结果，发现煳R在胚性愈伤组织和球形胚 阶段，筹异表达的mRNA多丁．后期阶段(子日i形胚利成熟胚阶段)，但蛋白质却较后期少。 推测胚『生愈伤组织阶段利球形胚阶段某些基冈止处”々录mRNA或以m时妒的形式存在， 为以后体胚发育作准备，此后由丁mRNA翻译产生人错}异蛋白，促使了特定阶段体细胞胚 胎的发生与发育。 关键词：龙眼：体细胞胚胎发生；mRNA筹别显示：基闪克隆：特异蚩白：apx 墨茎塑墨 Somatic DifferentialGene intheProcessof Expression in Lour． EmbryogenesisDimocarpus肠ngan Abstract somatic occurredthe Longan embryogenesisthroughfollowingstagesembryogenic embryoid，heart—shapedembryoid，torpedo—shaped callus，globular embryoid，cotyledonary andmatured wassimilartothatof embryoid cotyledonaryembryoid，which zygotic at culturesdifihent were embryo．Synchronized embryogenic developmental