布莱凯特黑牛PDSS1 基因的克隆测序及生物信息学分析.pdfVIP

瀚耥 ·Ger~etkss i1Breedi~g 2 3簿 簿49誉鬻2i蠼 布莱凯特黑牛PDSS1基因的克隆测序及 生物信息学分析 杨 莉 ．董雅娟 ，，，柏学进1,2,3，赵仕全I．，牛召珊 ，张新浩I_ (1．青岛农业大学动物胚胎工程 中心，山-4,-,青岛266109；2．山东省黑牛繁育工程技术研究中心， 山东青岛266109：3．山东布莱凯特黑牛科技股份有限公司，山东淄博256306) 摘 要 ：对布莱凯特黑牛PDSS1基因cDNA进行克隆测序 ，为进一步研究PDSS1基 因与布莱凯特黑牛胴体 内CoQ10 含量、肉质性状等的相关性提供理论基础 。针对EnsemblJ~布 的牛 (参照)PDSS1基 因中11个外显子 ，设计9对 引 物 ，对布莱凯特黑牛基 因组DNA进行PCR扩增 、克隆测序 ；利用软件Lasergene7．0拼接 出PDSS1基 因cDNA，提 交 至GenBank并进行生物信 息学分析 。结果表 明：布莱凯特黑牛PDss基 因cDNA全长1574bp，包括一个长1257bp的 完整 开放 阅读框 ，编码418个氨 基酸 。PDSS1蛋 白含 5个跨 膜 区 ，信号肽 由26个氨 基酸 组成 ，成 熟肽 由392个氨 基 酸组成 。布莱凯特黑牛与牛 (参照)、海福特牛、马、猪、犬、小 鼠、黑猩猩 、人在编码 区核酸序列 同源性依次为 99．9％、99．8％、89．0％、83．1％、88．6％、81．1％、80_8％、80．9％；推 导氨基酸序列 的同源性依次为 100％、99．8％、 92．0％、81．8％、91．6％、79．0％、80．4％、80．7％。本试验成功克隆 了布莱凯特 黑牛PDSS 基 因cDNA，并提 交至 GenBank(登录号：KC787698)。布莱凯特黑牛与牛 (参照)、海福特牛在PDSS!基 因编码 区的同源性极高，聚为一 类 ；与马 、犬、猪 、小 鼠、人 、黑猩猩等物种 的同源性相对低些。 关键词 ：CoQ PDSS1；克隆测序 ；生物信息学；布莱凯特黑牛 中图分类号 ：$823．2 文献标识码 ：B 文章编号 ：0258—7033(2013)21—0014—05 CoQ(CoenzymeQ)是生物有氧呼吸电子传递链 synthase，subunit 1) 和 hDLP1 (homo decaprenyl 中的必要成分 ，不仅对于能量产生至关重要 ，还有其 diphosphatesynthase，subunit2)上也同样被证实，且 他功能如活性氧 自由基 的清除、基 因表达的调控及 具有专一性 ，是重要 的限速酶l6l。研究表明，人体中 通过调控NAD+／NADH (烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 ，氧 PDSS1(decaprenyldiphosphatesynthase，subunit1)或 化态／烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 ，还原态)比率来控制 PDSS2(decaprenyldiphosphatesynthase，subunit2)基 细胞的氧化还原态等_ll。CoQ。除具备以上功能外，还 因的突变，都会引起少见的婴幼儿脏器疾病l7_。另有 是人体唯一可利用的CoQ类，而十聚异戊二烯焦磷 研究报道 ，通过对人类PDSS1基 因l2个外显子的直 酸合成酶 (decaprenyldiphosphatesynthase。DPPS)在 接测序 ，发现在第977bp(外显子10内)处纯合子T— CoQ。合成过程 中起决定性作用_2_。因此 ，关于CoQ．。 G的碱基替换导致蛋 白质中高度保守的天冬氨酸变 合成过程中关键酶DPPS及其相关基 因的研究也越 为谷氨酸 (D308E)，而人类PDSS1基 因和CoQ基 因的 来越多，但主要集 中在微生物转基 因工程 、发酵工程 突变 ，是体内氧化磷酸化作用减弱的原因_8l。 及人类临床医学方面。研究发现像粟酒裂殖酵母 (Js． 本研究以布莱凯特黑牛为试验对象，对其PDSS1 pombe)的