南瓜蛋白诱导人肝癌Hep-G2细胞凋亡的实验的分析.pdf

一、 中文摘要 南瓜蛋白诱导人肝癌Hep．G2细胞凋亡的实验研究 诱导凋亡作用；用NOD—SCID小鼠建立人肝癌HepG2细胞的肝原位移植瘤模型，评 价Cus在体抗肝癌的有效性；并初步探讨其诱导凋亡作用的可能机制，为南瓜蛋白 的抗肝癌机制提供理论基础。 方法： 1 MTT法测定Cus(以TCS为对照)对体外培养人肝癌HepG2细胞和人胚肝L-02 细胞增殖的影响，评价其对人肝癌细胞作用选择性； 2 利用NOD／SCID小鼠建立人肝癌原位移植模型，体内观察南瓜蛋白对人肝癌小鼠 原位移植瘤的抑瘤率。 3 电子显微镜观察南瓜蛋白作用后PANC-1细胞超微结构的改变。 4 流式细胞仪检测南瓜蛋白对HepG2细胞细胞周期和凋亡发生率的影响。 5 Annexin V／PI双染流式细胞术检测Hep62细胞凋亡 6 DNA断裂琼脂糖凝胶电泳观察是否有凋亡片段 7 ELISA检测南瓜蛋白作用后Hep 化。 8 western 化。 结果： MTT比色法结果显示，Cus对正常人胚肝(L一02)细胞的毒性作用(IC∞为 20．85u u g／m1)远小于对人肝癌(HepG2)细胞的毒性(IC∞为4．96g／m1)，Cus对人 肝癌HepG2细胞的具有一定的选择性。电子显微镜下见对照组细胞形态正常，细 胞膜结构完整，常染色质丰富，可见多个核仁。治疗组而细胞密度增高，染色质凝 集固宿，染色质边集，核固宿，核碎裂及凋亡小体的形成等细胞凋亡的表现；流式 2 细胞仪DNA倍体分析捡出典型的亚二倍体(sub-G。)凋亡峰，并且10 ug 呈明显的时间依赖性。Annexinv／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果显示 Cucurmosin作用的剂量依赖性，随着作用浓度的升高细胞凋亡率也随之增加。DNA 断裂琼脂糖凝胶电泳分析出现“阶梯状”DNA条带，呈约180-220bp整数倍递增分 布，提示DNA在核小体部位被切断，细胞发生凋亡。所有上述结采充分说明， Cucurmosin具有诱导Hep-G2细胞凋亡的作用。 在动物体内，人肝癌HepG2细胞／NO秘SCID小鬣原位移穗瘤模型治疗实验结果 l％，64．85％和51．19％。Western 人肝癌原位移植瘤的瘤重抑制率分别为71．1 blot分 10、20、40|l Bel-2蛋白 析结果表明：经2．5、5、 g／ml的Cus处理72h后， 表达下调、Bax表达上调，Caspase3的活性片段被不同程度的激活，呈浓度依赖 3、 性：用Caspase3、Caspase一9活性检测试剂盒测定，结果显示：Caspase Caspase-9均被激活，并且呈浓度依赖性。 结论： 比TCS对该肿瘤细胞的作用(I％约20．15ug／m1)强4倍多，并且对入胚肝细胞 系L-02细胞毒性(I％约为20．85ug／m1)小，其细胞毒作用具有相对选择性。 2、Cus能有效诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。 3、 cus对入肝癌HepG2缀胞小鼠原位移植瘤其有显著的增殖抑制作用，基剂 量依赖性。 然后激活caspase-9，并最终激活下游caspase一3有关。 关键词：核糖体失活蛋白南瓜蛋白HepG2细胞凋亡 二、Abstract The of experiment studyapoptosis—-inducingby Cucurmosin cells