苏云金芽胞杆菌Cry51Aa1和PS4蛋白结构的比较和抗癌谱筛选.pdf

摘要 目的：①比较苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt) 关系及结构异同，由结构相似性推测目的蛋白Cry51Aal蛋白可能具 有的抗癌活性；②测试Cry51Aal蛋白的抗癌活性及抗癌谱，筛选出 1Aal对靶癌细胞发挥毒性作用 1．2种敏感细胞株，并初步探讨Cry5 的机制，为研究Cry51Aal的功能提供新的生物学证据。 1Aal的理化性 方法：①采用生物信息学在线数据库分析Cry5 质并调取其氨基酸序列信息，同时调取已报道的6类19种抗癌 的系统进化树图，找出可能与Cry51Aal同源的PS蛋白；针对与 1Aal序列相似度最高的PS蛋白，进一步比较两者在一级和二级 Cry5 结构中的各项参数，并以SWISS．MODEL进行同源建模，比较两者 的三级空间结构，全面分析两者结构的异同。②纯化Cry51Aal蛋白 后，以18种细胞(包括12种人类肿瘤细胞，2种人类正常细胞，1 种鼠肿瘤细胞，3种鼠正常细胞)作为受试对象，利用MTT实验初 1Aal对各类细胞的细胞毒性作用，对敏感细胞株进一步 步筛选Cry5 分析时间和浓度因素对细胞生存率／抑制率的影响；③以流式细胞术 凋亡的方式发挥细胞毒性作用。 结果：①通过氨基酸序列聚类建立的系统进化树图中，Cry51Aal 与PS4的氨基酸序列相似度最高，达到36％，自引导评估得boostrap 值(自展值)70，认为可信度较好。从结构比较中进一步体现了两 者的结构相似性，两种蛋白模型在a．碳原子(Carboon alpha，CA)部 万方数据 胞发生肿胀等形态学改变，细胞形态改变的程度与浓度梯度呈现一致 性变化，随着作用时间的增加，肿胀的比例减少；③不同的细胞对 1Aal的敏感性存在差异，肿瘤细胞敏感性高于正常细胞，且不 Cry5 同肿瘤系统的细胞对Cry51Aal的敏感性存在差异，筛选到的 Cry5 细胞凋亡中可能发挥了重要作用。 1AaI 氨基酸序列上亲缘关系最近，两者的结构相似性较高；②Cry5 蛋白对多种人类肿瘤细胞具有细胞毒性，且敏感性存在差异。本次筛 选到的抗癌谱包括消化系统3个细胞株和生殖系统4个细胞株，胃癌 更大范围的抗癌谱验证；@Cry51Aal引起细胞发生形态学和细胞活 力的改变，且即细胞抑制率与蛋白浓度成存在剂量．反应关系，正比； ④Cry51Aal发挥细胞毒性可能是Caspase介导的细胞凋亡，且对细 胞的迁移能力发挥一定的抑制作用。 关键词：苏云金芽孢杆菌，Cry51Aal，人类癌细胞，细胞毒性，抗癌 谱 II 万方数据 ABSTRACT the and evolutionaryrelationship compare Objective：①To ofstructLIrebetween l fromBacillus consistencydifferenceCry5Aa andanti