丹参、川芎对正常人及硬皮病成纤维细胞松弛素受体LGR7表达的影响.pdf

中文摘要 【目的】 观察中药丹参和川芎嗪对正常人及硬皮病患者皮损的成纤维细胞增 殖的影响，并观察松弛素受体在正常人及硬皮病患者成纤维细胞表达的变 化及中药丹参和川芎嗪对松弛素受体表达的影响，从而探究中药抑制成纤 维细胞增殖的机制及松弛素受体在抗纤维化作用中能否作为药物作用的 靶点． 【方法】 1成纤维细胞培养 无菌条件下，将组织块放入DMEM培养液中漂洗，剪 x film l 0％胎 成1 film大小的组织块，将组织块均匀涂布于培养瓶壁，加入2 纤维细胞萌出，约20天成纤维细胞接近80％铺满培养瓶表面时，按1：2 比例传代继续培养，每3d～4d传代一次，取对数生长期的细胞用于实验。 2．MTTN定成纤维细胞增殖将对数生长期的成纤维细胞以10％DMEM培养 X uL细胞悬液， 24h 液调整成1 104／mL，接种于96孔培养板中，每孑L180 后细胞已贴壁，分别加入药物，并设空白对照组。在5％C02、37。C培养箱 MTT 150 中培养48h后，每孔加入5mg／mL20“L，继续培养4h，加入DMSO “L／孔，震荡10min，用酶标仪检测492nm处的吸光度值(oD值)。 3．成纤维细胞免疫组化 采用免疫组化S-P法，按免疫组化试剂盒说明 书工作流程操作，实验设阴性对照(用PBS代替LGR7)。 4．流式细胞仪 将对数生长期的成纤维细胞以10％DMEM培养液调整成1 瓶)，预培养48h。按实验分组加入含药培养基后，细胞继续培养24h。制 备成细胞悬液，加入4％多聚甲醛固定，离心去除固定液，加入3mLPBS洗 两遍，加入松弛素受体一抗，37℃孵育1小时，加入3mLPBS洗两遍，加 入FITC标记二抗，37。C孵育30分钟，避光保存，上流式细胞仪检测。 5．采用SPSSl1．0、．3统计软件包，数据均以均数土标准差(x土了)表示，组 间计数资料用t检验。 【结果】 1．丹参在10mg／mL以上对正常人和硬皮病患者成纤维细胞增殖有抑制作 用；川芎嗪在O．5mg／mL以上时对正常人和硬皮病患者成纤维细胞增殖有 抑制作用，达到5．0mg／mL则能完全抑制成纤维细胞的增殖。· 2．LGR7在正常人成纤维细胞胞浆及胞膜呈棕黄色，判读为阳性。LGR7 在硬皮病患者成纤维细胞胞浆及胞膜无棕黄色染色，判读为阴性。 3．中药丹参和川芎嗪均有降低正常人和硬皮病患者成纤维细胞上LGR7的 表达数量和表达强度的趋势 【结论】 丹参和川芎嗪达到一定浓度时对正常人和硬皮病患者成纤维细胞的 增殖均有抑制作用；中药丹参和川芎嗪可能有降低正常人和硬皮病患者成 纤维细胞上LGR7的表达数量和表达强度的作用。 【关键词】 硬皮病；成纤维细胞；丹参；川芎嗪；LGR7。 Il Danshenand forthe ofReIaxin Effectof Ligustrazineexpression and fibrobIasts heaIth SOIeroderma recepter(LGR7)onpeopIe SpeciaIity：DermatoIogy Li Author：Zhengang di n Tutor：Gao ABSTRACT i ve ObJect ofDanshenand tional theeffect Ligustrazine，tradi Byobserv