用酵母双杂交系统研究铜绿假单胞菌EtfA和EtfB蛋白的相互作用.pdfVIP

维普资讯 第 41卷 第 2期 南 开 大 学 学 报 (自然科学版) Vo1．41 NO_2 2008年 4月 ActaScientiarumNaturaliumUniversitatisNankaiensis Apr．2008 文章编号 ：0465—7942(2008)02—0001—06 用酵母双杂交系统研究铜绿假单胞菌EtfA和EtfB蛋白的 相互作用 白 芳，殷腾飞，徐海津，乔明强 (南开大学 生命科学学院，天津 300071) 摘要：EtfA蛋 白与EtfB蛋 白是铜绿假单胞菌 etfA基因和 etfB基因编码的蛋 白质，分别构成 电子传递黄 素蛋 白的a亚基和 p亚基．应用酵母双杂交系统对 EtfA和 EtfB蛋 白之间的相互作用进行研究，发现 EtfA与 EtfB之间存在较强的蛋 白质问相互作用，说明铜绿假单胞菌的电子传递黄素蛋 白是以异源二聚体的形式存在 于细胞内的；并推测EtfA和EtfB是电子传递链的重要组分 ，可能为细菌鞭毛的旋转提供能量． 关键词：铜绿假单胞菌；酵母双杂交；电子传递黄素蛋 白 中图分类号 ：Q933 文献标识码 ：A 0 引 言 铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)；t~--种广泛存在的革兰氏阴性细菌，它运动活跃，在临床上 常引起难治性反复性感染 ，是一种重要的条件致病菌 [1]． 电子传递黄素蛋白(electrontransferflavoprotein，ETF)是一类 以黄素腺嘌呤二核苷酸 (flavinade— ninedinucleotide，FAD)为辅酶 的蛋白，它是线粒体和细菌的异化途径及呼吸链 中各种酶之间重要的电 子载体 ，典型的途径是将 电子传递给ETF一泛醌氧化还原酶 (ETF—QO)[2]．目前 ETF已经成功地从哺乳 动物 (如人 ，鼠和猪)[3 中，以及一些细菌 中分离纯化出来 ，如脱氮副球菌(Paracoccusdenitrificans)，埃 氏巨球形菌 (Megasphaeraelsdenii)和食 甲基嗜甲基菌 (Methylophilusmethylotrophus)[6 ]．哺乳动物和某 些细菌的ETF都是以异源二聚体 的形式存在 ，由a和 p两个亚基构成[9 ．铜绿假单胞菌 PAO1基 因组 中，etfA基 因(PA2951)和 P 基 因(PA2952)分别编码 ETF的 a亚基和 p亚基 (www．pseudomonas． corn)．etfA和 P 基因与脱氮副球菌 ETF的a和p亚基基因分别有 77 和 76 的同源性 ，etfA编码 蛋 白EtfA包含一个保守的ETF—alph结构域 (pfam00766)，etfB编码蛋白EtfB包含一个保守的ETF—be— ta结构域 (pfam01012)，pfam00766和 pfamOlO12结构域在体 内能够形成异源二聚体 (www．pseu— domonas．corn)[． 体外条件下研究蛋 白质的聚合作用通常不能准确地反映其在体内的真实状况．蛋 白质形成同源或异 源二聚体或多聚体本质上是蛋 白质发生相互作用的结果 ，而酵母双杂交技术的出现为在胞 内研究蛋 白间 相互作用开辟 了新 的途径 [1卜¨]．应用酵母双杂交系统发现铜绿假单胞菌EtfA和EtfB蛋 白质之间在胞内 存在较强的相互作用 ，为深入研究铜绿假单胞菌的电子传递链提供了重要理论依据． 1 材料和方法 1．1 材料 酵母双杂交系统采用 Clontech公司 MATCHMAKERGAL4Two—HybridSystem3．酿酒酵母 (Sac— charomycescerevisiae)菌株 AH109，酵母双杂交表达载体 pGADT7，pGBKT7，对照质粒 pGADT7一T， 收稿 日期 ：2007—12一O8 基金项 目：国家 自然科学基金 ；天津市科技攻关项 目(06YFGZSH07100)；天津市应用基础研究计划项 目