软X射线单细胞辐照损伤的实验方法的研究.pdf

摘要 摘 要 细胞受到一定剂量的X射线辐射后会造成DNA的损伤，甚至引起细胞的 突变或死亡。研究细胞的辐射损伤及其生物学效应，将为放射治疗、危险评价、 辐射防护等提供理论基础。常规的X射线辐照损伤研究由于受到研究手段的限 制，只能对群体的细胞进行辐照和检测，所获得的研究结果是群体细胞的平均 效应，而不是单个细胞内的损伤效应。探索和发展适于研究单细胞辐照损伤的 方法，不但能实现检测单个细胞内的辐射损伤效应，更是丌展辐射旁效应研究 的必备前提。 本项实验研究以合肥国家同步辐射实验室软x射线显微术光束线为基本平 台，搭设了单细胞辐照研究的实验装置：同时，组建了细胞培养系统，优化了 细胞培养方法；探索了单细胞辐射损伤的检测方法。 单细胞辐照装置的搭设。软X射线从同步辐射光源引出，通过汇聚波带片 和针孔聚焦成微束，经过能量定标和光斑测定后对单个细胞进行辐照。根据同 步辐射储存坏束流强度的变化，通过软件控制微束照射细胞的时间，从而确保 受照细胞获得精确的辐射剂量。 细胞培养系统的组建和优化。建立了适于丌展单细胞辐照研究的细胞培养 系统和培养方法，传代培养了人宫颈癌细胞系(Hela)作为实验样品，运用细 胞爬片技术将单层细胞定位在软X射线光路中。设计并制作了细胞生长环境维 持系统，以保持细胞在辐照过程中的处于正常生理状态。 单细胞辐射损伤及生物学效应的检测。分别采用了单细胞凝胶电泳技术和 同步辐射红外显微光谱技术进行检测。从实验结果来看，单细胞凝胶电泳技术 通过对彗尾各项指标的分析，灵敏地检测到低剂量辐射造成的细胞内DNA的 单链或双链断裂，并且表现出损伤程度和辐射剂量的依赖关系。同步辐射红外 显微光谱技术通过对细胞内红外吸收光谱的对比分析，精确地反映出辐射造成 细胞内DNA链的断裂以及嘌呤／嘧啶的甲基化等。 利用同步辐射微束开展单细胞的辐射生物学效应研究，具有其它辐射研究 方法无可比拟的优势。本项实验研究为探索利用合肥光源开展单细胞的辐射生 物学效应研究构建了系统的方法，拓展了同步辐射红外显微光谱技术在检测单 细胞辐射生物学效应方面的全新应用。 关键词：同步辐射软X射线辐射效应单细胞凝胶电泳红外显微光谱 Abstract ．．．．．．． ————————————————————————————————————————————————～一 ABSTRAeT When the cell livingwasirradiated withsome DNA byX．ray doses，theincells willbe andeven resultinthecell damaged mutationor the radiation death．Studying andthe effectsin damages biological irradiated a cells，will theoreticalbasis provide forradiation risk assessmentand therapy, radiation In protection．convention