植物生理学实验 2.pptVIP

生命科学学院 龙云 * 原色：红、蓝和黄。从理论上讲，所有其他颜色都是由于这三种颜色混合产生的。?间色：绿、紫和橙。这些颜色通过混合原色形成。 复色：橙红、紫红、蓝紫、蓝绿、橙黄和黄绿。这些颜色通过混合上述六种颜色构成。 叶绿体色素的提取、分离及其理化性质的鉴定 生命科学学院 龙云 生命科学学院 龙云 实验四 叶绿体色素的提取、分离及其理化性质的鉴定 一、层析用叶绿体色素的提取及色素分离 1、原理 叶绿体色素各组分的脂溶性和分子量不同，可用层析法于有机溶剂中分离。 2、色素提取 新鲜菠菜叶 → 去中脉 → 剪碎 → 烘干 → 研磨成叶粉 → 丙酮提取 特点：该提取液不含水分，色素提取较完全，层析效果较好。 生命科学学院 龙云 3、分离（纸层析法） 用毛细管在层析纸上点样2-3次 → 于层析瓶中加入CCl4约10 ml +少量无水Na2SO4 → 层析纸悬挂于层析瓶中 → 层析（至层析剂接近层析纸前沿） 注意事项： ①层析纸勿接触层析瓶内壁，以防止色素带向瓶壁扩散； ②层析瓶不要水洗，否则有拖带现象或拖带更严重。 4、作业 将层析结果（层析纸）贴在实验报告中，并标出各色素带的名称。 生命科学学院 龙云 二、叶绿体色素的提取及理化性质的鉴定 1、原理 叶绿体色素有特殊的吸收光谱，有荧光现象，可以发生一些基团反应等，这些理化性质可通过一些实验来鉴定。 2、叶绿体色素的提取 菠菜叶（去主脉）3 g → 放入研钵 → 丙酮 5 ml + CaCO3, 石英砂少许 → 研磨成匀浆 → 加丙酮15 ml，摇匀 → 过滤到小烧杯中 → 滤液（备用） 生命科学学院 龙云 3、叶绿体色素理化性质的鉴定与结果分析（p.54-55） ①叶绿素荧光现象观察：取提取液（2 ml）于一支试管中，比较在入射光和反射光下颜色的差异，并解释之。 ②光对叶绿素的破坏作用：2 支试管盛取提取液少许（0.5 ～1 ml）分别置于强光和黑暗下，实验结束时，观察其颜色的变化，并解释之。 ③铜代反应：取提取液少许（1 ml）于一支试管内，逐滴加入浓 HCl至提取液变成褐色，然后加入CuAC2（醋酸铜）晶体少许，并于酒精灯上加热，再观察颜色变化，并解释之。 生命科学学院 龙云 4、黄色素与绿色素的分离 在色素丙酮提取液中加入碱（30% KOH甲醇溶液），使叶绿素（本身是一种双羧酸的酯）与碱发生皂化反应，产生的盐能溶于水。加入水相后，黄色素与皂化叶绿素分别溶解于上层有机相和下层无机相，从而分离开来。 具体操作按《指导》p.55 步骤 “4” 进行。 5、色素溶液的吸收光谱观察 用分光镜按《指导》p.55 步骤 “5” 进行，并列表指出各色素溶液的吸收光谱，据此总结两类色素的吸收光谱。 注意：分光镜调好后，不要挪动，以免重调。 6、作业 除了对上述观察到的现象进行解释和回答有关问题外，还请回答 p.56 “实验作业” 1，2问题。 生命科学学院 龙云 2.3.2 Absorption spectrum 太阳光的光谱：太阳光→分光镜： 红、橙、黄、绿、青、蓝、紫7色连续光谱。 太阳光→叶绿素溶液→分光镜： 有部分光变弱或出现暗带---------吸收光谱 说明：这些光谱被叶绿素溶液吸收了。 叶绿素：红光区（640-660nm）和蓝紫光区(430-450nm) 类胡萝卜素：蓝紫光区 藻蓝蛋白：橙红光区 藻红蛋白：绿黄光区 生命科学学院 龙云 红 蓝 黄 紫 绿 橙红 紫红 蓝紫 橙色 黄绿 橙黄 蓝绿 生命科学学院 龙云 蓝 浅蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 金橙 红 粉 紫 互补光 生命科学学院 龙云 叶绿素的提取 叶绿素是一种酯，因此不溶于水。通常用含有少量水的有机溶剂如80％的丙酮，或者95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶水＝4.5∶4.5∶1的混合液来提取叶片中的叶绿素，用于测定叶绿素含量。 之所以要用含有水的有机溶剂提取叶绿素，这是因为叶绿素与蛋白质结合牢，需要经过水解作用才能被提取出来。 提取方法 研磨法 浸提法 0.1g叶+10ml混合液浸提 研磨法提取光合色素 生命科学学院 龙云 铜代叶绿素反应 卟啉环中的镁可被H+所置换。当为H+所置换后，即形成褐色的去镁叶绿素。 去镁叶绿素中的H+再被Cu2+取代，就形成铜代叶绿素，颜色比原来的叶绿素更鲜艳稳定。 可用醋酸铜处理来保存绿色标本。制作绿色标本方法：用50%醋酸溶液配制的饱和醋酸铜溶液浸渍植物标本(处理时可加热) 向叶绿素溶液中放入两滴5％盐酸摇匀，溶液颜色的变为褐色，形成去镁叶绿素。 当溶液变