2种相手蟹线粒体12S rRNA基因序列分析.pdf

水 产 科 学 v01．27 第27卷第9期 No．9 2S 2种相手蟹线粒体1 rRNA基因序列分析 徐敬明 (重庆文理学院生命科学系，重庆永川402168) 摘要：测定了红螯相手蟹和褶痕相手蟹线粒体12SrRNA基因部分片段的序列，前者为572 bp，后者 为576 bp。二者的核苷酸序列A、T、G、C的含量相似，分别为42．5％、37．6％、11．9％、8．0％；42．0％、 37．O％、12．5％、8．5％；不包括8处插Ⅳ缺失位点，两序列间有48个变异位点，核苷酸差异率为 8．42％，其中转换30个、颠换18个，转换与颠换比约1．67。对国内外相手蟹长度为383bp的12S rRNA基因同源序列进行分析，A+T含量为76．6％一81．4％，明显高于G+C的含量，且存有84个多 态位点。系统发生树的拓扑结构显示，所有的相手蟹分别聚为3大支，代表着3个不同的属即相手蟹 属、栉齿蟹属和仿相手蟹属；这与形态学分类结果相一致。 关键词：红螯相手蟹；褶痕相手蟹；12SrRNA；序列；系统发生 中图分类号：Q178．53；Q953 文献标识码：A 文章编号：1003—11ll(2008)094)483-04 相手蟹(Sesarma)属甲壳纲、十足目、方蟹科、月采自山东省El照沿海泥岸，前者采白潮间带，后 相手蟹亚科，主要分布于潮间带和潮上带…。近 者采自潮上带，浸泡于95％的乙醇中保存备用。每 来，一些学者根据幼体形态学和分子系统学的研究 种取3个个体用于序列分析。 而将方蟹科提升为方蟹总科，相手蟹亚科提升为 1．2试验方法 1．2．1 DNA提取 相手蟹科_3】。Serene等H1将红螯相手蟹(S． 从红螯相手蟹和褶痕相手蟹的步足和螯足中 haematocheir)和褶痕相手蟹(S．plicata)分别归属 到宽额蟹属(胁幻，删叩瑚)和仿相手蟹属(Parasesar-约取50mg肌肉，采用传统的酚一氯仿抽提法从 ma)。Hohhuis”’根据动物命名优先原则又将红螯相肌肉组织中提取基因组DNA。将乙醇沉淀后DNA 手蟹归属到栉齿蟹属(Chiromantes)。 溶解于40斗l超纯水，放入4℃冰箱6h，最后一20 动物线粒体DNA(mtDNA)因其分子量小、母℃保存备用。 系遗传、较核DNA进化速率快等特征而广泛的应 1．2．2PCR扩增 12S 用于扩增12SrRNA基因片段的2个引物的正 用于进化生物学研究中；一般说来，mtDNA rRNA基因有较高的保守性，易于进行PCR引物的 设计和扩增，适合于种及其以上分类阶元的差异研 究∽。7j。12SrRNA基因序列已被用于一些蟹类的 初步研究悼d41；有关相手蟹12SrRNA基因序列研 buffer，2．0 为25“I，反应液中含2．5—10×PCR mmol／ 究，仅见国外学者对其进行了序列分析【15。181；有关 dNTPs(2．5mmol／L)，2．0MgCl2(25