产脂肪酶海洋嗜冷菌的鉴定及酶学性质研究.pdfVIP

维普资讯 高技术通讯 2008年7月 第 18卷 第7期 产脂肪酶海洋嗜冷菌的鉴定及酶学性质研究① 郝建华②一 孙 谧③ 王跃军 王清印一 袁 翠 刘均忠 ( 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛266071) ( 中国海洋大学 青岛266003) 摘 要 从东海的深海底泥中筛选出一株产脂肪酶的海洋细菌EastSeaG5—1415，该菌为革 兰氏阴性好氧菌，短杆状，0．9～1．3gan×1．5～3．8tan，无鞭毛，无芽孢，无色素，菌落光滑不 透明，过氧化氢酶和氧化酶阳性，甲基红实验阴性，氧化葡萄糖产酸，可耐受 10％的NaC1。 此菌最适生长温度为 18％，最高生长温度为35qC，在0qC也能生长，是典型的嗜冷菌。菌 株脂肪酸种类为Cl7：1(28．2％)，C18：19(49．7％)，辅酶Q一8是其主要的异戊烯醌类，DNA 中G+C含量为45．2oto1％。以16SrRNA同源性为基础构建 了相关种属细菌在 内的系统 发育树，在系统发育树中，分离菌株EastSeaG5—1415与Psychrobacterglacincola在同一分支， 二者的序列相似性为97．6％，DNA杂交显示与P．glacincola最为相近，达到87％。结合 形态和生理生化试验，将其鉴定为嗜冷杆菌 P．glacincola。同时对其所产脂肪酶的性质进 行了初步研究。该菌所产碱性脂肪酶最适反应温度为35％，在 5qC时仍有较高酶活，酶活 达到23％，最适pH值为9，属低温碱性脂肪酶。 关键词 脂肪酶，低温酶，海洋嗜冷菌 满足现代化学工业的需求_ll，如果从海洋中筛选出 0 引 言 具有独特酶学性质的脂肪酶，必将会对酶制剂工业 近年来随着生物技术的发展，寻找具有全新性 带来新的生机和活力ll。国外从 20世纪 70年代 质的酶 已成为 国际酶制剂研究的热点l1-5]。2001年 就开始 了对 产脂肪酶海洋微生物 的筛选 实 著名的EMBO杂志载文指出，目前制药、化学和食品 验ll，他1，但相关研究的报道较少，而海洋低温碱性 工业中使用的酶普遍存在不稳定的弱点，新的替代 脂肪酶的报道更为少见l14,15~。我 国对海洋微生物 性工业酶资源存在于极端环境生物中_l6J。极端生物 脂肪酶的研究虽然起步较晚，但也有所发现，张金 除了用作未来工业用酶和新的生物技术工具酶的主 伟、杨从发等人已从海水、海泥及海洋生物的消化道 要来源外，还是研究生命起源及域外生命的重要生 分离出了碱性脂肪酶产生菌 1【6-18j。由于海洋微生 物材料_l7j，具有重大的科学价值。海洋生物特别是 物的海水培养和脂肪酶分离纯化存在一定困难，因 生活在极端环境下的海洋微生物，能产生丰富的极 此海洋脂肪酶在制备与应用的研究受到了限制。本 端酶。与陆地微生物所产生的酶相比，海洋酶具有 文报道了从东海深海底泥中筛选出的一株碱性脂肪 更为独特的酶学性质。脂肪酶是一类特殊的酯键水 酶产生菌 EastSeaG5—1415，经鉴定为嗜冷杆菌 y— 解酶，即分解高级脂肪酸和丙三醇形成的甘油三酸 chrobacterglac#wola，同时对该菌株的生长特性及所 酯酯键的酶，可应用于油脂水解、食品风味和香味的 产脂肪酶的性质的初步研究作了介绍。 改进、皮革绢纺脱脂 、低等油脂的改性等，特别是应 l 材料与方法 用在油脂化工和有机合成工业中时，其酶催化的反 应具有条件温和、耗能低、原料要求低、成品质量高