陈皮多糖分离纯化、结构表征及其清除自由基活性的研究.pdfVIP

摘 要 陈皮为芸香科柑桔属植物橘（Citrus reticulate Blanco ）及其栽培变种的干燥成熟 果皮，别名橘皮。国内外学者对其主要成分进行了大量的研究，但鲜见其多糖的研究 报道。本文选取水溶性陈皮多糖为研究对象，确定其提取和分离纯化工艺，分析分离 得到的各组分理化特性，并初步探讨陈皮多糖的体外抗氧化活性，以企为民间医药的 深入开发提供理论基础。主要研究内容如下： 4 1. L (3 )正交法考察陈皮多糖的最佳提取工艺，发现陈皮水溶性多糖的适宜提取条件 9 为固液比 1:10、提取温度 100℃、提取时间 6h，在此条件下多糖提取率为 7.61% 。为 了进一步纯化水提醇沉得到的陈皮粗多糖，采用聚酰胺脱色、Sevag 法脱蛋白、透析 处理，获得精制多糖（PSP ）。含量测定表明 PSP 总糖含量为 17.80%，半乳糖醛酸含 量为 28.38% ，还原糖含量为 3.59%，蛋白质含量为 0.99% 。β-消除反应说明 PSP 有 O-糖苷连接，刚果红实验说明 PSP 分子存在螺旋构象。 2. 陈皮多糖PSP 经 DEAE-cellulose 阴离子交换柱梯度洗脱，分离得到四个组分：PSM 、 PSE 、PST 、PSF 。凝胶渗透色谱与旋光度测定结果表明：四组分为均一多糖，重均分 4 5 5 5 子量依次约为 0.8×10 Da 、1.1×10 Da 、2.1×10 Da 及 2.1×10 Da ；比旋度依次为–128° 、 +145° 、+201° 、+189° 。单糖组成分析发现：PSM 主要含有 Glu 和 Gal，摩尔比为 1:1.1； PSE 主要含有 Ara 和 Gal，摩尔比为 1:1.2；PST 主要含有 Rha ；PSF 主要含有 Rha 、 Ara 和 Gal，摩尔比为 1.5:1:1.1。结合 TLC 对陈皮粗多糖的单糖组成分析结果推断， 陈皮多糖是一种组分复杂的杂多糖，单糖组成有 6 种，其中 Rha 、Ara 、Glu 和 Gal 所 占的比例较大。傅里叶红外图谱分析表明：PSM 是一种带有结晶水的低分子多糖，结 构中存在 β-型吡喃糖苷键；PSE 、PST 和 PSF 结构相似，是部分羧酸甲酯化的 α-半乳 糖醛酸多聚糖。 3. 陈皮多糖主组分 PST 经 SephadexG-75 凝胶柱层析进一步纯化，得到一亚组分 PST-a 。凝胶渗透色谱与琼脂糖凝胶电泳分析表明 PST-a 为单一组分，重均分子量为 5 1 13 1.0×10 Da 。从酸水解、IR、H-NMR 及 C-NMR 分析结果推断：PST-a 是分支较少的 杂多糖，主链由(1→4)-α-D-GalA 构成，存在 2-O-和 3-O-乙酰基，部分半乳糖醛酸被 甲酯化，鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖等以α-吡喃糖形式存在于末端或侧链。 4. 以抗坏血酸为阳性对照，采用 Fenton 反应体系和 DPPH 自由基对陈皮多糖和黄酮 的体外清除自由基活性进行研究。结果显示陈皮多糖与黄酮均有显著的清除DPPH·和 I OH· 的能力，并呈一定的量效关系，表明多糖与黄酮是陈皮的抗氧化活性成分。由 SC50 值可知，陈皮黄酮对自由基的清除效能接近于抗坏血酸，多糖对自由基的清除能力较 前两者低一至两个数量级。 关键词：陈皮；多糖；纯化；结构分析；自由基 II Purification, Structure Characterization and Free Radical Scavenging Activity of Polysaccharides from Tangerine Peel Liao Sumei （pharmaceutical ayalysis ） Supervisor: Huang Qinghua、professor