旋毛虫肌幼虫强反应原性抗原基因的筛选及生物学特性分析.pdfVIP

维普资讯 吉林农业大学学报 2008，30(2)：213～218 http：／／xue1)ao．jtau．edu．tit Jouma／ofminAgriculturalUniveni~ E-mail：flndxb@vip．sina．com 旋毛虫肌幼虫强反应原性抗原基因的 筛选及生物学特性分析 吴秀萍 ，赫荣华 ，邹洪斌 ，杨志东 ，P．Boire0u2，刘明远 (1．吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室，长春 1313062；2．法国食品卫 生安全局 ，巴黎 94703) 摘 要：应用感染旋毛虫60d猪血清为抗体探针，对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫筛选，获得旋毛虫肌 幼虫期强反应原性抗原基因，利用生物学信息网站(NCBI、BLAST等)及其相关软件(DNAstar等)对获得的基 因进行序列分析。结果表明：筛选约2．5X105个重组噬菌体，获得 13个阳性克隆，有6个克隆为同一个基因， 编码蛋白与染色体结构维持蛋白(SMC蛋白，structuralmaintenanceofchromosomeproteins)同源性为48．1％，在免 疫筛选中均有较强的反应信号；有3个克隆为同一个已知基因(AAF63473)，编码蛋白与丝氨酸蛋白酶抑制因 子(Serinepmteaseinhibitor)同源性为99％，在免疫筛选中反应信号次之；还有2个为同一个基因，与旋毛虫线粒 体(MitochondrionofTrichinellaspiralis)DNA有较高的同源性(同源性为 87．7％)，编码核糖体大亚基 RNA，其他 2 个为未曾报道过的新基因，编码不同的未知蛋白，这4个克隆在免疫筛选过程中反应信号相对较弱。得到的2 个强反应原性的旋毛虫肌幼虫cDNA分子，其中相对信号最强cDNA分子编码SMC蛋 白，另一个编码丝氨酸 蛋白酶抑制因子，二者有望用于旋毛虫病的诊断候选抗原基因。 关键词：旋毛虫；肌幼虫；反应原性；抗原基因；筛选 中图分类号：R383．15 文献标识码：A 文章编号：1000—5684(2008)02—0213—06 ImmunoscreeningandCharacterizationAnalysisofStrongReactive AntigenicityGenesofMusdeLarvaeStageofTrichinellaspi~lis WU Xiu—ping ，HE Rong—hua ，ZOU Hong—bin ，YANG Zhi—dong ，P．Boireau ，LIU Ming— yuan (1．KeyLaboratoryofZoonosesofMinistryofEducation，InstituteofZoonoses，JilinUniversity， Changchun130062，China；2．UMR956INRA—AFSSA—ENVA—PUVM，Maison-Alfort， 94703，France) Abstract：ToobtaingenesencodingstrongimmunoreactiveantigensofTrichincllaspiralisinmusclelar— vae(ML)stage，musclelarvaecDNAlibraryofTrichincllaspiraliswasscreenedusingtheinfectedswine selllnlfor60dayswith Triehinclla 凰 nadpositivecloneswere sequencednadnaalysed．13po sitive cloneswereobtainedfrom 2．5X105recombinnatclones ． Sequenceanalysis