农药类环境激素剂量暴露对鲫鱼内分泌干扰效应及生物标志物研究.pdf

蘩要 农药类环境激素低剂量暴露对鲫鱼 内分泌干扰效应及生物标志物研究 摘要 本文以典型农药类环境激素甲草胺、阿特拉津为对象，选用鲫鱼为模式 生物，研究不同剂量、尤其是低剂量甲革胺、阿特拉津暴露对鲫鱼的生殖、 内分泌和免疫功能的影响。试验设计甲草胺和阿特拉津的暴露浓度为：1／8、 1／16、1／64、1／256、1／1024、1／4000 LC50，采用半静态水体染毒方法，试验 期间每天更换一半染毒溶液，以确保暴露浓度恒定不变，持续染毒2个月。 应用分子生态毒理学等研究方法及体内、体外相结合手段，开展环境激素 作用机理和剂量．效应关系研究，尝试建立低浓度暴露生态毒理学研究方法 体系，寻找水环境污染的早期预报的生物标志物，为环境激素的生态和健 康风险评价提供科学依据和技术支持。主要研究结果如下： l、低剂量甲草胺及阿特拉津暴露可抑制鲫鱼的肝脏和精巢的生长、发 育，使性腺指数和肝腺指数明显下降，作用影响呈j#单调剂量效应关系。 观察组织切片发现，甲革胺及阿特拉津暴露可损伤鲫鱼肝脏细胞结构，使 肝脏细胞出现空泡、坏死、细胞肿大、胞质疏松等病理变化；并破坏鲫鱼 精巢结构，影响其生殖能力，具有生殖毒性。 2、低剂量甲草胺及阿特拉津暴露对鲫鱼肝脏谷胱甘肽(GSH)和激素 摘要 代谢关键酶【谷胱甘肽硫转移酶(GST)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 (UDPGT)]活性的影响进行评价。结果表明，甲草胺及阿特拉津对上述各个 酶系产生一定的干扰，呈现非单调剂量效应关系。GST和UDPGT活性及GSH 含量对甲草胺、阿特拉津暴露均较敏感，这些指标从分子水平上反映了污 染物对鱼体肝细胞的损伤，影响鲫鱼体内血清激素的平衡，造成内分泌系 统的干扰危害，引起一系列的生理生化反应。 3、采用放射免疫技术，研究低剂量甲草胺和阿特拉津暴露对鲫鱼性激 腺原氨酸(T3)】的影响。结果表明，甲草胺可使鲫鱼体内的血清激素E2、TSH 和T3水平上升，而T的水平下降。阿特拉津可使E2和T3水平上升，而对T及 TSH没有显著影响。研究显示，鲫鱼体内血清性激素E2／T的比值是一种可以 有效地指示污染水体中这两种农药类环境激素对鱼类的内分泌干扰毒性的 生物标志物。 况下，无法代谢体内产生的E2，使得E2得以在体内累积，表现为明显负 相关的趋势。并且GST在调节甲状腺激素水平的过程中起重要作用，随着 甲草胺及阿特拉津的染毒浓度增加GST酶活力下降而T3水平则持续上升。 鲫鱼肝脏激素代谢关键酶的活性的改变，可影响鲫鱼体内激素的水平，表 明内分泌干扰效应的机制。 5、研究建立测定鲫鱼卵黄蛋白原的间接竞争ELISA方法。结果表明， Ⅱ 蘩要 都能够诱导雄性鲫鱼体内产生卵黄蛋白原(VTG)。经低剂量甲草胺染毒后， 鲫鱼体内VTG总体呈现为倒“U”型。而经阿特拉津诱导的鲫鱼体内的VTG 呈现为不规则的波动，无明显剂量效应关系，对于鲫鱼丽言，阿特拉津表 现出内分泌干扰活性弱于甲草胺。并且雄鱼体内的VTG积累到一定程度以 后，能导致肝、肾等各种组织病变。 6、提取鲫鱼血液总DNA，通过RAPD试验筛选出合适的引物，结果 表明，低剂量甲革胺和阿特拉津暴露对鲫鱼DNA有损伤作用，可引起鲫鱼 DNA序列发生变化，使DNA片断缺失或增加，并且基因多态性增加，存 在一定的至突变性，呈非单调剂量．效应关系。 7、从鲫鱼血液中分离淋巴细胞体外培养，采用噻唑蓝(MTT)比色法开 展对、淋巴细胞生长活性的影响实验，结果表明，两神环境激素对淋巴细胞 活性的抑制作用存在较明显的剂量。效应关系，甲草胺和阿特拉津对淋巴细 鱼淋巴细胞增殖的影响实验结果表明，甲草胺在浓度达到7pg／L时就对淋巴 细胞增殖产生明显的抑制作用，而阿特拉津则在浓度达NSOI，tg／L时才对淋 巴细胞增殖产生抑制作用。 8、从鲫鱼头肾中分离纯化得到巨噬细胞，体外培养，用甲草胺和阿特 拉津染毒。结果表明，甲草胺和阿特拉津对巨噬细胞的半数抑制浓度分别