普通小麦及其近种lmw-gs的鉴定、编码基因克隆与进化分析.pdf

摘要 小麦贮藏蛋白是影响小麦品质的主要蛋白，主要包括醇溶蛋白和谷蛋白。谷蛋白 HMW-GS与LMW-GS的含量及组成可直接影响小麦面粉的加工品质。本研究以普通 小麦及其近缘种为材料，利用SDS．PAGE技术通过对它们中LMW-GS的分离和鉴定， 设计等位基因特异PCR(AS-PCR)引物，对其编码基因进行分子克隆、序列测定与 分析，预测LMW-GS的二级结构特征，分析贮藏蛋白基因家族的分子进化关系。为 利用基因工程改良小麦品质提供参考依据，为迸一步探讨小麦起源与进化奠定基础。 1。普通小麦及其近缘种中LMW-GS的分离鉴定和基因克隆 在部分品种中存在。 根据LMW-GS编码基因5’和3’端的保守序列，设计了5对特异性引物，分别以 P1355707)的基因组DNA为模板进行扩增，均获得了较明显的扩增条带，然后分别 录GenBank。 2．普通小麦及其近缘种LMW-GS基因的序列特征分析 的特征序列，有TATA框，CAAT框和胚乳框，它们对基因表达有着重要的作用。基 ．74，．62到．57两个位置上，二者均有一个CAAT框在．10到．6的位置上。一个胚乳 置上含有序列为AAATAA的多腺苷酸化信号，均分别位于终止密码子下游72到 77，130到136，141到147这三个位置上。 分别由一个终止密码子TGA终止编码，各编码280个、303个氨基酸。根据推导出 的氨基酸序列，计算出成熟蛋白质的分子量，分别为37．8KD、37．7KD、37．4KD、 因此推测这12个基因编码的蛋白质均为c亚基。通过序列特征分析，它们均为 TAA终止编码，编码316个氨基酸。根据推导出的氨基酸序列，计算出成熟蛋白质 的分子量为34．2KD。因此推测这个基因编码的蛋白质为C亚基。通过序列特征分析， 27个Q的寡聚谷氨酰胺链等特征，与小麦加工品质正相关，可能为候选的优质基因。 大小为1074bp，由两个连续1：AA终止密码子终止编码，编码356个氨基酸。根据推 导出的氨基酸序列，计算出成熟蛋白质分子量为38．3KD，因此推测此基因编码的蛋 的编码区内部都有终止密码子，导致了这些基因不能表达，为沉默基因。 3．LMw．GS基因编码蛋白的序列比对 结果表明，每一类型的基因与其同类型的基因具有较大的序列相似性。 63位上多出一个半胱氨酸残基外，其余基因编码的蛋白均具有8个半胱氨酸残基。 我们推测，这个额外半胱氨酸残基的出现，可能增加分子间二硫键数目，使面团粘弹 性增加。因此，我们推测克隆的这2个新基因可能和小麦的优良品质相关。 V 大量的氨基酸的插入或替换。一个长的N．端重复区对小麦面粉的品质也有积极作用。 因此，我们推测克隆的这3个新基因可能和小麦的优良品质相关． 4．LMW．Gs的二级结构预测 AILMW-m2、 本研究采用PSIPRED2．0二级结构预测方法，预测结果显示， 因。 5．LMW二Gs基因的遗传进化关系 进化树分析表明：I型基因明显比另外两种基因分离出来得早，而LMW-s基因 点的分离则大约发生在9．149百万年前。 关键词：小麦，低分子量谷蛋白亚基，SDS．PAGE，分子克隆，分子进化 VI Abs仃act The isthe protein main ofwheat．Itcontains storage componentaffectingquality and arethe ofwheat gliadingtutem，Thegtuteninsmajorcomponents proteins， storage whichconsistof and high