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第二章 工具酶 一、填空题 1.严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是——-------的酶。基因工程中把那些具有识别------------------------------------------的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。 2．—---—--年Luria和Human在T偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细菌的--------------一现象。 3．1970年，Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割 DNA，这个酶后来被命名为------——，这是第一个分离到的Ⅱ类限制性内切核酸酶。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的—---------—。 5.Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在20～40kDa，通常由—-----—亚基所组成。它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA杂合双链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有—-------—专一性，也具有——------专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有--------——，产生末端的DNA片段或—----—的DNA片段。作用时需要-------------作辅助因子，但不需要—------—和------------——。 6．完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1)一------------------------- (2)------------------------------------------------------------------。 7.Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别——----个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有-----——倾向，即它们在识别序列中含量较高。 8．EcoK是I类限制性内切核酸酶，分子组成是α2β2γ，分子量是300kDa。在这些亚基中，α亚基具有——------作用；β亚基具有——------的活性；γ亚基的作用则是-----------------一。 9．个体之间DNA限制性片段长度的差异叫-------------------------------。 10．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自—---—，第二、三两个字母取自—------—，第四个字母则用——-----表示。 11.限制性内切核酸酶AcyI识别的序列是5-GRCGYG-3，其中R——————————，Y———————. 12．在酶切反应管加完各种反应物后，需要离心2秒钟，其目的是—---—和------——-. 13．部分酶切可采取的措施有：(1)—------------------—(2)------------------—— (3)—————————————等。 14.第一个分离的限制性内切核酸酶差异是—-----—；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是—--------------—。 15．限制性内切核酸酶BsuRI和Haelll的来源不同，但识别的序列都是—----------—， 它们属于—---------—。 16．由于DNA是由4种碱基组成的，所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该是—---------------—。 17．SalI和NotI都是哺乳动物中识别序列稀有的酶，在哺乳动物基因组的5kb片段中，找到NotI切点的概率是—-------—。 18．部分酶切是指控制反应条件，使得酶在DNA序列上的识别位点只有部分得到切割，它的理论依据是--------------——。 19．I类限制酶识别DNA的位点和切割的DNA位点是不同的，切割位点的识别结合有两种模型，一种是—---------—，另一种是一------------------------。 20．限制性内切核酸酶通常保存在---------——浓度的甘油溶液中。 二、判断题 1．限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制实现的。 2．限制性内切核酸酶在DNA中的识别／切割位点的二级／三级结构也影响酶切效率。一般来说，完全切割质粒或病毒DNA，要比切割线状DNA需要更多的酶，最高的需要20倍。 3．如果限制性内切核酸酶的识别位点位于DNA分子的末端，那么接近末