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舌发育异常与胎鼠地塞米松腭裂的关系 【摘要】 目的：本实验通过小鼠胚胎腭裂模型制备，探讨地塞米松对胎鼠舌体高度、宽度及舌肌黏膜厚度的影响。方法：选取孕鼠30只，随机分为对照组和实验组，实验组于11.5GD腹腔注射地塞米松，对照组注射等量生理盐水。获取13.5GD～16.5GD的腭裂胚胎模型，取其头部Bouins液固定，石蜡包埋，标准颅颌冠状位5μm连续切片，进行HE染色和bcl2免疫组化染色。光镜下进行形态学测量并对所得数据进行统计学分析。结果：1.bcl2阳性信号呈棕褐色颗粒，存在于核膜周围及胞浆中。2.实验组、对照组中不同时期横行舌肌与纵行舌肌数量比例不同，13.5GD纵行舌肌数量较多，16.5GD横行、垂直舌肌数量较多。3.同一时期，实验组舌体高度明显高于对照组。结论：地塞米松诱导的胎鼠腭裂的发生与舌发育异常有关，而且舌体高度在一定程度上参与了腭裂的形成过程。 【关键词】 腭裂;小鼠;地塞米松；舌肌；bcl2 小鼠腭裂的形成受多方面因素的影响，其中胎鼠腭发育的异常、舌发育的异常等均参与了腭裂的形成过程。其中胎鼠腭发育的异常我们已研究过[1,2]，本实验重点探讨舌的发育过程及其发育异常对腭裂形成的影响。 1 材料与方法 1.1 实验试剂与器械 试剂：醋酸地塞米松、Bouins固定液、苏木精—伊红染液、兔bcl2多克隆抗体、即用型SABC免疫组化试剂盒（武汉博士德生物有限公司）。 仪器：OLYNPUS CX31，Motic 6.0医学图像分析系统。 1.2 实验动物与方法 健康成年未生育昆明小鼠，体重22～25g，北京大学医学部实验动物中心提供，下午6∶00雌雄2∶1合笼，次日早7∶30和下午4∶30检查阴栓，发现阴栓之日定为孕期第0天（0GD，gestation day）。所得孕鼠随机分为实验组、对照组。实验组孕鼠于11.5GD腹腔注射50mg/kg剂量的地塞米松，对照组注射等量生理盐水。各组均在13.5GD、14.5GD、15.5GD、16.5GD颈椎脱臼处死，取出胚胎，共得到胎鼠284只，其中实验组196只，对照组98只。取头Bouins液固定，以喙部向下做定向石蜡包埋、5μm连续冠状位切片。 1.3 染色 HE染色：二甲苯脱蜡、梯度酒精、蒸馏水洗。苏木精染色5min、盐酸—酒精分化、伊红染色2min、梯度酒精脱水、二甲苯透明、封片。 免疫组化染色：常规脱蜡至水；抗原修复3min；0.01mmol/L PBS液洗3min×3次；3%H2O2 室温避光孵育15min；0.01mmol/L PBS液洗3min×3次；5%BSA封闭。加入bcl2（1∶100），湿盒中4℃孵育过夜。其他步骤按即用型SABC免疫组化试剂盒使用说明书进行。苏木精复染，盐酸—酒精分化、蓝化、脱水、透明、封片。光镜观察舌体高度、舌体宽度及舌黏膜厚度的变化。 1.4 数据处理 用OLYMPUSCX31显微镜连接在计算机上进行观察：各组中每只动物随机选取同一解剖平面，10倍目镜下统计测量舌体高度、舌体宽度及舌黏膜厚度，以SPSS统计软件进行ANOVA方差分析。 2 结果 2.1 舌体的形态学观察 舌由表面的黏膜和深部的舌肌组成。舌肌由纵行、横行及垂直走向的骨骼肌纤维束交织构成，纵行肌所占比例最多，垂直肌次之，横行肌最少。在舌的不同生长发育阶段，舌肌的纵行、横行及垂直走行的骨骼肌纤维束组成比例不尽相同。13.5GD时舌体中央可见较多的星状、纺锤状细胞，舌肌未完全分化。正常组14.5GD时在靠近舌背面侧可见到核圆形的舌肌纤维横断面，舌体开始下降；在15.5GD时舌体继续下降，双侧腭突水平相向生长；在16.5GD时舌降至口底，舌发育基本完成。实验组与正常组发育过程相似，但部分个体发育延迟（图1～2）。13.5GD时纵行肌占较大比例，14.5GD、15.5GD时垂直肌所占比例不断增加。由13.5GD到14.5GD时，舌肌细胞由密集变得稀疏，14.5GD,15.5GD,16.5GD舌肌纤维密度几乎无差别。但实验组HE染色切片中，胞浆及细胞外基质较多，染色淡，舌肌纤维粗大肥厚(图3～4)。各时期bcl2阳性信号的表达无明显变化。 2.2 舌体变化 13.5GD两组胎鼠舌体厚，呈矢状位生长；正常组14.5GD以后舌体变扁宽，而实验组则呈现不同程度的发育迟滞。实验组与对照组比较，实验组舌体高度明显高于对照组。对照组中舌体高度随孕期日的增加而逐渐降低，16.5GD时舌体已完全降至口底，与成年小鼠的舌体相似。实验组中舌体高度亦随孕