第四章 灭菌.ppt

第四章 灭菌 第一节 基本概念 第二节 灭菌原理 第三节 灭菌过程 第四节 问题分析及处理手段 化学工业出版社 学习目标 了解基本概念及灭菌的基本方法； 掌握湿法灭菌的基本原理； 熟悉灭菌过程及注意事项； 理解各种因素对灭菌质量的影响。 第一节 基本概念 灭菌 利用物理或化学的方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程。 纯种培养 指仅让一种微生物的菌株在培养基内或培养基上进行生长。 致死温度与致死时间 是指杀死微生物的极限温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间。在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。热阻 微生物对热的抵抗力。是指微生物在某一特定条件下的致死时间。相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。 实消 将配制好的培养基输入发酵罐（种子罐）内，通入蒸汽直接加热，再冷却至发酵所要求的温度的灭菌过程。 空消 将饱和蒸汽通入未加培养基的发酵罐（种子罐）内，进行罐体的湿热灭菌过程。 连消 连续灭菌，将培养基在发酵罐外，通过专用消毒装置，连续不断的加热，维持保温和冷却，然后进入发酵罐（或种子罐）的灭菌过程。 美拉德（Maillardom）反应 氨基酸的氨基与糖类的羰基易发生反应，生成羰氨化合物，缩合成更复杂的棕色到黑色化合物“类黑色素”的反应。 第二节 灭菌原理 一、 灭菌的方法——物理法、化学法 物理法 （1）加热灭菌 ：干热灭菌和湿热灭菌 ①干热灭菌 灼烧灭菌法：利用火焰直接将微生物灼烧致死 干热空气灭菌：用干热空气使微生物细胞发生氧化、体内蛋白质变性达到杀灭杂菌的目的。 ②湿热灭菌 利用饱和蒸汽灭菌的方法。湿法灭菌常用于大量培养基、设备、管路及阀门的灭菌。 （2）过滤除菌：用过滤的方法阻留微生物达到除菌。 （3）电磁波、射线灭菌：产生的高能粒子进行灭菌，紫外线最常用，穿透能力低，只能用于表面灭菌。 化学法 化学药剂与微生物发生反应而灭菌。适用于生产环境及小型器具的灭菌等。方法：浸泡、擦试、喷洒、气态熏蒸等。常用的化学药剂：高锰酸钾、漂白粉、75%酒精溶液、新洁尔灭、甲醛、过氧乙酸、戊二醛和酚类等。 二、湿热灭菌原理 湿热灭菌是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。在对培养基灭菌过程中应该注意湿热灭菌法对培养基营养成分的破坏也是很强的。因此，在灭菌过程中应选择合适的工艺条件，既保证杂菌能够彻底杀灭，又要使营养成分的破坏减少到最小。 灭菌的彻底与否是以能否杀灭热阻大的芽孢细菌为标准的。 1．对数残留定律 在一定温度下，微生物受热后，其死活细胞个数的变化如同化学反应的浓度变化一样，遵循分子反应速率理论。微生物热死速率可以用分子反应速率表示。研究证明，培养基中微生物受热死亡的速率与残存的微生物数量成正比，这就是对数残留定律。 即：t = lLg 其中N为经过时间t灭菌后活微生物的残留数。 N0 为灭菌前的菌体数。即灭菌的程度在计算中要选定一个合适度，常采用N=0.001计算，也就是说1000次灭菌过程有1次失败的可能。 2．培养基灭菌温度的选择 温度必须选择既能达到灭菌目的，又能使培养基的破坏降至最低的灭菌温度。 工业生产上为了实现彻底灭菌和减少营养物质的破坏，选择较高的灭菌温度，并采用较短的灭菌时间，这就是通常所说的“高温快速灭菌法”。 第三节 灭菌过程 湿热灭菌的方式主有实罐灭菌、空罐灭菌和连续灭菌。 发酵罐或种子罐灭菌前的准备工作 ? 放罐或移种后，关闭种子罐或发酵罐的空气进气阀，开排气阀，待罐压放尽后，打开人孔盖，用压力在3.0×105Pa以上水仔细冲洗罐内壁、内件及搅拌。待水排尽后，关闭罐底阀，微开空气进气阀通入少量空气。在搅拌磁力开关处挂安全警示牌，在有人监护的情况下下罐检查。检查罐内各焊缝、空气环形分布管、出料管、接种管、温度计套管、视镜等是否有杂物堆积，是否被腐蚀或穿孔、搅拌叶及轴底瓦的紧固情况。消除罐内死角，擦净视镜。 出罐后盖上并上紧人孔盖，若在常压状态下压力表指针不归零，应立即更换压力表 。开大空气阀，关排气阀升压。待压力升至 0.1MPa后检查人孔盖、搅拌机械密封及各法兰的严密度，压力表的灵敏度和准确度，无误后关空气进气阀，开排气阀将罐压放尽。检查接种阀、罐底阀胶皮垫，视情况而定是否更换胶皮垫。关闭冷却水进、回水阀，打开冷却水管上吹口及放水阀，等待灭菌消毒。另外，发酵罐或种子罐冷却用的蛇管或夹套要定期用8.0×105Pa的水试漏。 图4-2 实罐灭菌示意图