兔类es细胞体培养体系的优化.pdfVIP

致 谢 时光荏苒，转眼间硕士求学生涯即将结束，在河南农业大学的七年也慢慢步 入尾声。在这一段青春奋斗的岁月里，承载着太多的成功、失败，喜悦和悲伤。 母校如同一位长者见证了我的成长，给予了我一段弥足珍贵的人生经历。 在研究生生活即将闭幕之际，首先感谢导师张志平副教授为我提供了难得的 学习机会。恩师在学习、科研、生活和工作等各方面都给予我无微不至的关怀； 恩师渊博的学识、严谨的治学态度以及忘我的科学献身精神深深地影响着我的现 在、将来，乃至一生。为了学生，恩师言传身教，操碎了心，在此论文即将付梓 之际特向恩师致以最崇高的敬意和最衷心的感谢! 硕士就读期间，同样得到了临床上各位老师的指导与支持：感谢王新庄教授 给予的科研启发和指导，感谢邓立新副教授、贺秀媛副教授、仝宗喜副教授及张 君涛老师在理论知识上的热心指导。 硕士就读期间，同样得到了实验室许多师兄师姐的耐心指导和师弟师妹的大 力协助。感谢已经毕业的任卫青硕士、何俊丹硕士和秦佳辰硕士，他们扎实的科 研基础和知识积累，给予了我最初的启发，带我步入干细胞这个殿堂。感谢王朝 阳、刘伟、吕靖玉、徐秋勤、王鸽、曹书郡、翟明胜、蒋金航、许晓婷、时金玲、 原婷婷、张淑芳、郝世秋、李杨等对本人工作无比热忱的协助，并表达深深的谢 意! 此外，还要感谢基础兽医学刘忠虎老师在核型分析鉴定方面的耐心指导。 最后，感谢父母和弟弟一直以来的支持和鼓励，你们的关爱和支持永远是我 前进最大的动力! 谨以此文献给所有的帮助过我，提携过我的师长，前辈和家人，谢谢! 李小佳 2013年5月 本研究由 国家自然科学基金 1001 (编号：3 096) 提供资助 目 录 摘 要…………………………………………………………………………………………………………………………。1 1文献综述…………………………………………………………………………………………3 1．1畸胎瘤干细胞研究概况…………………………………………………………………3 1。2早期胚胎来源的ESC研究概况…………………………………………………………4 1．3原始生殖细胞研究概况…………………………………………………………………6 1。4胚胎干细胞生物学特性…………………………………………………………………7 1．5胚胎干细胞分离培养的影响因素……………………………………………………10 1．6胚胎干细胞的鉴定方法………………………………………………………………．．12 1。7胚胎干细胞的应用前景及存在问题…………………………………………………．．14 2．引 言………………………………………………………………………………………17 3．材料与方法……………………………………………………………………………………19 3．1试验材料…………………………………………………………………………………19 3．1．1试验动物…………………………………………………………………………19 3．1．2主要试剂…………………………………………………………………………19 3．1．3主要仪器设备……………………………………………………………………19 3．1．4主要溶液的配制…………………………………………………………………20 3．1．5培养液配制………………………………………………………………………20 3．2试验方法…………………………………………………………………………………2l 3．2．1小鼠胎儿成纤维细胞的分离培养………………………………………………21 3．2．2小鼠胎儿成纤维细胞的传代培养………………………………………………21 3．2．3饲养层制备…………