猪传染性胃肠炎毒膜蛋白亲和多肽的筛选与鉴定.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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猪传染性胃肠炎毒膜蛋白亲和多肽的筛选与鉴定.pdf

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猪传染性胃肠炎毒膜蛋白亲和多肽的筛选与鉴定

目录目录中文摘要…………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………一Ⅲ 1前言…………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1猪传染性胃肠炎研究进展………………………………………………………………．1 1．1．1 TGEV的生物学分类地位……………………………………………………………l 1．1．2 TGEV粒子结构………………………………………………………………………2 1．1．3 TGEV结构蛋白及其生物学功能……………………………………………………．2 1．1．4 TGEV理化特性………………………………………………………………………4 1．1．5 TGEV疫苗的研究进展………………………………………………………………4 1．2噬菌体展示技术的研究进展……………………………………………………………．．6 1．2．1噬菌体随机肽库………………………………………………………………………6 1．2．2噬菌体筛选……………………………………………………………………………6 1．2．3噬菌体展示技术的应用………………………………………………………………7 1．3研究的目的与意义………………………………………………………………………．9 2材料与方法…………………………………………………………………………………．10 2．1实验材料………………………………………………………………………………。10 2．1．1病毒株、细胞株、菌株及质粒……………………………………………………．10 2．1．2主要工具酶、抗体及分子生物学试剂盒…………………………………………．．10 2．1．3主要药品及试剂……………………………………………………………………．10 2．1．4实验试剂配制………………………………………………………………………10 2．1．5主要实验仪器设备…………………………………………………………………11 2．2试验方法………………………………………………………………………………．．11 2．2．1提取表达菌中的质粒………………………………………………………………．1l 2．2．2 Rosetta感受态的制备………………………………………………………………12 2．2．3阳性质粒转化到Rosetta感受态……………………………………………………12 2．2．4 2．2．5 2．2．7纯化后蛋白的复性…………………………………………………………………14 2．2．8噬菌体随机十二肽库对靶分子亲和配体的生物淘选………………………………15 2．2．9结合克隆的特征鉴定………………………………………………………………17 2．2．10所选多肽配体共有氨基酸序列的推导及合成……………………………………19 2．2．11 2．2．12 2．2．13合成多肽对TGEVM蛋白的特异性分析…………………………………………21 i 东北农业大学农学硕士学位论文 2．2．14多肽的体外抗病毒活性检测………………………………………………………22 3实验结果……………………………………………………………………………………．21 3．1重组质粒的双酶切鉴定以及菌液PCR鉴定……………………………………………2l 3．2重组蛋白的表达及鉴定…………………………………………………………………2l 3．3重组蛋白的纯化…………………………………………………………………………21 3．4噬菌体十二肽库对靶分子的淘选结果及功能鉴定……………………………………．．21 3．4．1淘选产物的滴度测定………………………………………………………………21 3．4．2噬菌体结合克隆的ELISA初步鉴定………………………………………………21 3．4．3噬菌体结合克隆模