猪圆环病毒2型壳蛋白病毒样颗粒的制备及其免疫原性的研究.pdfVIP

摘要 circovirus 猪圆环病毒2型(porcine type2，PCV2)的感染与断奶仔猪多系统衰竭综合 征(postweaningmultisystemicwasting 5～18周龄仔猪，患病猪主要临床表现为生长缓慢、体重减轻、呼吸凼难、黄疸、腹泻、皮炎、 淋巴结肿大和病毒血症，致死率在1％～10％之间。PCV2感染旱世界性分布，已成为危害养猪业健 康发展的重要病冈之一。国内外相继注册了包括灭活疫苗、嵌合疫苗和亚单位疫苗，在预防PCV2 感染中发挥了重要作用。由于抗原制备成本居高不下，导致市场供应的各种疫曲．单头份价格在8～ ORF2基冈编码 48元人比币之间，高昂的疫苗价格严重制约了PCV2疫苗的推广使用。根据PCV2 的主要免疫原性蛋白Cap具有在体外白我组装成病毒样颗粒(Virus—like 为研制PCV2VLPs疫苗奠定了基础。 1．将PCV2 命名为p-SMK-Cap。将p-SMK—Cap转化到表达感受态细胞BL21一Condonplus(DE3)中表达重组蛋 白。利用SDS电泳可观察到部分重组蛋白以水溶性形式表达，亲和层析纯化目的蛋白以单 一特异性条带出现，人小约为43 有良好的反应原性，命名为His—SUMo—Cap。 有任何氨基酸残基的“天然Cap蛋白(nCap)”，大小为23kDa。利片J透射电镜观察nCap蛋白能 够自我组装形成直径17nm大小的VLPs，形态结构类似与亲本PCV2 Cap蛋白，它能够和PCV2血 清抗体反应并形成抗原抗体复合物，说明￡c011表达的重组蛋白能够形成正确病毒农壳结构。 利．}{j流式细胞仪检测三种Cap抗原免疫小鼠后21天和28天时外周血T淋巴细胞亚群的变化的结 间的CD3’T淋巴细胞总数、CD3’／CD4+和CD3+／CD8+淋巴细胞总数和百分率差异不显著。 4．利用纳米粒度仪检测制备的PCV2 VLPs人小，然后以其作为抗原接种猪，以InvCap nCap 疫苗作为免疫对照。PCV2nCapVLPs抗原免疫猪后产生的抗体消长规律同InvCap疫苗基本一致， 免疫后的猪在7天后发生抗体阿l转，直剑免疫后28天，抗体仍然表现为上升趋势。淋巴细胞增 殖试验和流式细胞仪的检测结果表明，不同类型的Cap抗原可以刺激机体的Thl和Th2型细胞免 疫反应，IL一4和IL一10和IFN—Y在外周血中的含量明显高于未免疫猪。 以上研究结果证明体外制备的PCV2 VLPs疫苗有确实的刺激机体体液免疫和细胞免疫 Cap 反应的能力。 关键词；猪圆环病毒2型；衣壳蚩白；病毒样颗粒；基冈jT：程疫曲．；免疫原性 Abstract Porcinecircovirus associated谢nl type2(PCV2)isclosely post-weaningmultisystemicwasting characterized swine．PMWSis emaciation，decreased syndrome(PMWS)in by weightgain，dyspnea， 1 viremia．Itaffects5to8weeksof lymphnodes，and jaundice，diarrhea，dermatitis，enlarged pigs age， 诵tll1％_l rates．PCV2infectiondistri