短短芽孢杆菌xh的鉴定及其抗菌物质的分离、纯化与部分性质研究.pdfVIP

摘要 a’3 11菌株是本实验室从泰山土壤分离获得的一株拮抗细菌。该菌株 对多种动、植物病原细菌和真菌如：大肠杆菌、鸡巴氏杆菌、金黄葡萄球 菌、黑胸败血病菌、棉花枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、茶轮斑病菌等有较强 拮抗作用，该菌株抑菌谱广，菌株发酵性状优异，发酵液性质稳定，显示 了诱人的开发前景。本文通过菌体形态特征观察、生理生化指标测定和 16S rDNA序列分析，对该菌株进行了鉴定。选择了适合该菌株的发酵条 G．50柱层析、高效液相色谱(HPLC) 件，并通过硫酸铵沉淀、Sephadex 和质谱(Ms)分析，对抗菌物质进行了分离纯化，并研究了其部分性质。 主要内容如下： 1通过菌体形态特征观察、生理生化指标测定、16srDNA序列及其 系统进化树分析，鉴定a’311菌株为短短芽孢杆菌(白℃v曲钟f可珊6陀伽)， 命名为短短芽孢杆菌xDH。该菌株的16srDNA序列己在美国GenbaIlk 注册，登录号为D0279738。 2筛选到一个适合该菌株的发酵条件。培养基配方：葡萄糖169，可 (NH4)2s04 摇瓶振荡培养48h。 G．50柱层析，可将有 3发酵液经40％饱和度硫酸铵盐析和sephadex 效物质与其他组分进行粗分离。以乙腈．o．1％TFA水溶液和甲醇．O．4％乙 酸水溶液为流动相，选择合适的HPLc条件，确定最佳HPLC条件为甲醇： O．4％乙酸(28：72，v～)，色谱柱Kromasilc18柱(250×4．6mm，5“m)， 得抗菌物质的分离纯化更进一步。质谱分析表明，A、B两组分的分子量 分别是218和392。 4抗菌物质粗品在水、甲醇、乙醇中溶解度较大，丙酮和乙醚中次之， 在氯仿和苯中不溶解；茚三酮反应为阴性：耐高温；对酸敏感；对蛋白酶 和紫外线照射不敏感；在270砌和220nm附近有最大紫外吸收。 5该菌株抑菌谱广，对多种病原细菌和真菌有拮抗作用。其中，抗菌 MIC为9．375¨g，mL，MBCl8．750¨g，mL。 关键词：短短芽孢杆菌；鉴定：抗菌物质；分离：纯化 Identificationof曰阳v西口c龇6肥，括XDHandisolation OfitsantibacteriaI andcharacterization substance Abstract a’3 actiVities 11，isolated丘DmsoiJ，exhibitedpotcntgro训hi1111ibitory several against patllogens，suchas凡疆口一“坍。砂驴Dr“川，印．V邪f哩居cm所， Fusdrium o码sporHm，Phyuostictdthes哆『olin，Escherichincoli，Pds把tn|￡lla as wasidentified m“加c胁，印砂focDcc“s日“陀姗and勘c“船Sp．It 16SrDNA B旭v曲dcff，姗6旭v话XDH by biochemicalfeanlres．ThebestfeHnentationconditionwas t}le and chosen，and extracted．Themainresuhswereas antibacterialsubstarlcewasisolatedaIld f0110、Ⅳing： 11was