禽流感病毒ha合成肽与m2e重组蛋白免疫保护作用的初步研究.pdfVIP

  Anhui Agricultural University Dissertation for the Masterate The Research on Protection of Synthetic HA2 Peptide and Recombinant M2e Protein of Avian Influenza Virus Candidate: He Wen-wen Supervisor: Prof. Wei Jian-zhong Cooperant Supervirsor: Prof. Zhu Qi-yun Academic Degree applied for: Master of Agriculture Speciality: Preventive Veterinary Medicine Research field: Infectious diseases of domestic animals College: College of Animal Science and Technology June, 2013         中文摘要 禽流感(Avian Influenza，AI)是由 A 型流感病毒(Influenza A virus，AIV) 引起的禽 类疾病综合征，该病传播迅速，传染性极强。AIV 不仅能感染禽类，也能感染人，是 危害人类健康和养禽业的最重要传染病之一，给人类生活和生产造成了重大损失。目 前 AIV 根据血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)可分为 17 个 HA 亚型和 9 个 NA 亚型，HA 和 NA 具有高度变异性，同时各亚型流感病毒间也 缺乏有效的交叉保护，这都制约了禽流感的有效防控及其疫苗的发展。 HA 是流感病毒表面主要的保护性抗原之一，能诱导机体产生中和抗体，含有多 个 T/B 细胞表位，HA2 位于 HA 的C 端，含有高度保守的融合序列，基于 HA2 保守 区域的通用疫苗研究一直是一个热点。基质蛋白 2(matrix protein 2，M2)是流感病毒 表面的跨膜蛋白，由 97 个氨基酸组成，膜蛋白 M2 的氨基酸序列高度保守，尤其是 N 端仅由 23 个氨基酸残基组成的胞外区(M2 extracellular domain，M2e) ，尽管经历了 四次世界性的流感大流行，都未发现明显差异，故有可能发展成为具有交叉保护力的 “通用流感疫苗” 的候选抗原。为了寻找具有广谱保护作用的通用流感疫苗，本研究根 据中国 H5 和 H9 亚型流感病毒的流行情况，针对流感病毒 HA2 基因的保守区域设计 合成多肽，同时以流感病毒高度保守的 M2e 基因为基础，表达重组蛋白，并通过攻 毒保护试验，比较和评价 HA2 合成肽与 M2e 重组蛋白对 BALB/c 小鼠的免疫保护作 用，为广谱型流感疫苗的深入研究提供一定的基础。具体研究内容如下： 1.禽流感病毒 HA2 合成肽免疫保护性的初步研究 通过比对 GenBank 中国H5 和 H9 亚型流感病毒 HA 基因，针对 HA2 亚单位的保 守区域设计合成多肽并在其末端耦联载体蛋白。用合成的多肽(LAH-KLH) 、 LAH-KLH+CpG 、KLH 、PBS 与弗氏佐剂混合后分别于第 0 周和第 3 周肌肉注射 BALB/c 小鼠，二免两周后采集小鼠血清用 ELISA 检测 LAH 特异性 IgG 及 IgG1/IgG2a/IgG2b ，同时分离脾脏细胞和肺脏细胞用 ELISPOT