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稳定表达鸡氨肽n的mdck细胞系建立及其初步鉴定
目 录
目录嶝嬲
摘要………………………………………………………………………………………………．．I
英文摘要………………………………………………………………………………………～II
1前言…………………………………………………………………………………………………………………………．1
1．1鸡传染性支气管炎的研究进展…………………………………………………………一l
1．1．1IB的流行病学…………………………………………………………………………1
1．1．2IB的临床症状…………………………………………………………………………l
1．1．3
IB的发病机制…………………………………………………………………………2
、．、．4 IB娲病原学…………………………………………………………………………一2
1．1．5IB的防治…………………………………………………………………………………5
1．2氨肽酶N研究概述………………………………………………………………………5
1．3研究的目的及意义………………………………………………………………………．6
2材料与方法……………………………………………………………………………………7
2．1实验材料…………………………………………………………………………………．7
2．1．1质粒、菌株、毒株和细胞系…………………………………………………………7
2．1．2试验动物……………………………………………………………………………一7
2．1．3主要工具酶、试剂盒和抗体…………………………………………………………7
2．1．4主要生化试剂…………………………………………………………………………7
2．1．5仪器设备……………………………………………………………………………．．8
2．2试验方法…………………………………………………………………………………8
2．2．2重组质粒的鉴定……………………………………………………………………．1l
2．2．4重组蛋白的纯化及复性……………………………………………………………．14
2．2．5鸡氨肽酶N多克隆抗体的制备与鉴定……………………………………………。14
2．2．6稳定表达细胞系的建立……………………………………………………………．15
2．2．7稳定表达细胞系的检测……………………………………………………………．18
2．2．8病毒感染实验………………………………………………………………………．18
2．2．9病毒检测……………………………………………………………………………18
3结果………………………………………………………………………………………………………………………．．19
3．1重组质粒pET30a．cAPN的构建………………………………………………………．．19
3．2重组蛋白的表达及纯化复性……………………………………………………………20
3．2．1重组蛋自的表达……………………………………………………………………．20
3．2．2重组蛋白的纯化与复性……………………………………………………………．21
万方数据
东北农业大学农学硕士学位论文
3．3鸡氨肽酶N多克隆抗体效价检测………………………………………………………21
3．4IBV非易感细胞系的鉴定………………………………………………………………22
3．5转染细胞免疫荧光检测…………………………………………………………………22
3．6MDCK细胞的G418最适工作浓度的确定……………………………………………。23
3．7稳定表达cAPN的MDCK单克隆细胞系的筛选及鉴定………………………………23
3．8病毒感染实验……………………………………………………………………………25
3．9病毒感染后RT-PCR检测………………………………………………………………25
4讨论……………………………………………………．…………………………………………………………………．27
4．1重组cAPN蛋白的表达及其纯化和复性…………………………
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