致绵羊脑炎李氏菌在模型小鼠体内的动态分布及acta、inlb毒力基因的序列测定.pdfVIP

摘 要 李氏杆菌病(Listeriosis)是一种重要的人畜共患病原菌,主要由单核细胞增多 性李氏杆菌引起。本菌对人、家畜、家禽、野生动物均有侵袭力[7]，可引起人及 各种动物的脑炎、败血症及流产，在公共卫生方面有其特殊的重要性。近年来， 有关LM 对人及动物的致病机理成为研究的热点. 本研究通过对LM 标-2 株和绵羊-90 株LD50 的测定，建立人工感染小鼠模型， 采取感染后不同时间小鼠的脏器，采用PCR 方法、分离培养及病理组织学方法对 感染模型小鼠体内的李氏杆菌动态分布及各器官的病理组织学变化进行初步研究 以并对致绵羊脑炎李氏杆菌分离株的actA 和inlB 毒力基因进行了克隆及序列分 析，研究结果如下： 8 1、利用Karber 法计算得知：LM 标-2 株的LD50 为： 4.180 ×10CFU/ml；S-90 的 8 LD 为：2.85×10 CFU/ml。表明S-90 株的毒力强于标-2 株。 50 2、S-90 株感染后 2h，脾、肝、肾、心血组织中均可检测到李氏杆菌DNA，同时 从上述脏器也可分离到李氏杆菌；感染后6h 大脑中可检测到李氏杆菌DNA，并在 感染后72h 可分离到该细菌；感染4-6h 后脾、肾、心血、肝脑即开始出现病理变 化和组织学变化。标-2 株则是在感染后2h，均可以从脾、肝、肾、心血、大脑中 检测到李氏杆菌，同时从脾、肝、肾、心血中可分离到该菌，感染后8h 大脑中可 检测到李氏杆菌DNA，而大脑需要在72h 后分离到该菌。感染6h 后脾、肾、心血、 肝脑即开始出现病理变化和组织学变化。说明S-90 株更容易侵袭各个脏器和突破 血脑屏障。 3、采用PCR 分别扩增致绵羊脑炎单核细胞增多性李氏杆菌和食源型单核细胞增多 性李氏杆菌actA 结构基因和inlB 结构基因的部分片段，结果含有actA 基因为标 -2、S-90；含有inlB 基因为标-2、S-90;并将含有actA 结构基因和inlB 结构基 因的PCR 产物克隆至pMD19-T 载体上，通过PCR 和双酶切鉴定后进行序列测定， 测序后的序列与GenBank 上相应的序列作比较，结果显示，含有actA 结构基因的 标-2 株、S-90 株与原序列的同源性为99.10%、92.71%，含有inlB 结构基因的标 -2、S-90 与对应的原序列的同源性为：99.68%、92.54%。表明不同来源的李氏杆 菌在多态性方面存在一定的联系。 该研究结果为进一步研究人及家畜的李氏杆菌致病机理提供了有价值的试验 数据，为今后研究LM 致病的分子机制奠定了基础。 关键词：致羔羊脑炎李氏杆菌；小鼠模型；分布；毒力基因；克隆 研究类型：B （应用基础研究） I Abstract Listeria monocytogenes (LM) ,It caused by Listeria monocytogene.It has invasiveness on human,domestic animal,domestic fowl,wildness.It can cause encephalitis 、septicaemia and embryotocia,having the significant importance on public health.Recently,the pathogenic mechanism on human and animals by listeria monocytogenes become hot spot. Through determining the LD50 of the scal-2 and sheep-90,artificial infecting mouse model was built.Distribution of Listeria monocytogenes and path