表达h5亚型禽感病毒m2基因和ha基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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表达h5亚型禽感病毒m2基因和ha基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力

柴茂：表达H5亚型禽流感病毒M2基因和HA基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力的构建及其免疫效力研究生：柴茂导师：彭大新教授陈素娟副教授刘秀梵教授中文摘要 H5亚型禽流感(Avain influenza 要采取的预防和控制措施是疫苗免疫。由于H5N1亚型禽流感病毒(Avainvirus， AIV)容易产生抗原变异，疫苗的研制速度跟不上抗原变异的速度，有必要开展广谱性疫苗的研制。M2蛋白是AIV的一种跨膜蛋白，具有高度保守的抗原表位，是研究具有交叉 M2蛋白、共保护功能疫苗的理想候选抗原之一。因此，我们构建了单表达H5亚型AIV 表达M2蛋白和HA蛋白的重组鸡痘病毒，并对其免疫效力进行了评价，为研制广谱性禽流感疫苗奠定了基础。 1．H5N1亚型AIV缺失跨膜区M2基因的原核表达 Overlap KDa 检测结果显示，获得了可溶性的36 sM2融合蛋白。以纯化蛋白免疫小鼠制备血清，应，表明sM2融合蛋白具有良好的免疫原性。 2．M2蛋白单克隆抗体的制备以100 阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆筛选，获得4株单抗，分别命名为1A9、扬州大学硕士论文 M2 蛋白的检测。 3．表达H5亚型AIVM2基因和HA基因的重组鸡痘病毒的构建感染鸡痘病毒的鸡胚成纤维细胞中，经蓝白斑筛选获得纯化的重组鸡痘病毒rFPV-M2、 4．重组病毒免疫效力试验 7日龄SPF鸡随机分组，分别于颈部皮下注射2×104 mL／羽。免疫鸡在 rFPV-HAM2和wt．FPV；同时设RE．5、RE．6油苗和PBS对照组，O．2 d，分别不同时间称重、检测血清HI抗体、取外周血进行淋巴细胞活化实验。免疫后21 H5N1亚型AIV攻毒，观察鸡的免疫保护效果，并测定用105一EID50／羽的两种不同clade 活化水平高于rFPV-M2免疫组，但两者均高于其它组。分别使用LK株和HA株攻毒，关键词：H5亚型禽流感病毒；M2基因；单克隆抗体；重组鸡痘病毒；交叉保护柴茂：表达H5亚型禽流感病毒M2基因和HA基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力 ConstructionandImmuneE of cacy Virus M2 andHA ofH5 FowlpoxCo--expressinggene gene avianinfluenzavirus subtype M．S．candidate：MaoChai Advisor：Prof．Daxin Peng Associate Chen