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重组dev g与ul24基因杆状病毒构建及gh与ul24蛋白细胞定位
摘要
enteritis
鸭病毒性肠炎(DuckⅥralEnteritis，DYE)是由鸭肠炎病毒(Duckvirus，DEV)}I
起的鸭、鹅和天鹅等水禽的一种急性、接触传染性的疱疹病毒感染。目前DEV的研究已经
进入基因组时代，截至目前至少已克隆出41个完整的DEVORF。本研究以克隆的DEV
gH
与UL24基因为出发点，对DEVgH与UL24蛋白的特性进行初步研究。
I双酶切#12，最后将这两段酶切产物与
I与S茄I双酶切pMDl8-T-gHl，匈融I与勋n
I与EcoRI双酶切
因并将该基因连接pMDl8-T载体构建克隆载体pMDl8-T-UL24，用劢D
pBlue-UI．24。分别将鉴定为阳性的重组质粒纯化，与线性化的杆状病毒共转染Sf9昆虫细胞，
经3轮蚀斑筛选，获得了纯化的重组杆状病毒。
I双酶切，构建重组真核表达载体
与真核表达载体pcDNA3．1(+)分别用H／ndm与EcoR
鼠以制备抗2口蛋白血清。间接免疫荧光试验表明，实现了DEVgH蛋白在体外的瞬时表达，
并发现该蛋白定位于细胞外膜。将转染细胞用Trizol法提取细胞总RNA，gH基因特异性引
物进行RT-PCR检测，结果出现目的条带，进一步证明了2蚪蛋白在体外的表达。
板进行扩增。将扩增后的目的基因亚克隆至pEGFP-C1载体中，构建重组表达载体
pEGFP-UL24，将鉴定为阳性的重组质粒纯化并用脂质体法转染293细胞。用荧光显微镜观
细胞总RNA，UL24基因特异性引物进行RT-PCR检测，结果出现特异性的条带，进一步证
明了UL24蛋白在体外的表达。
关键词：DEV：gH基因；UL24基因；重组杆状病毒；细胞定位
ofRecombinantBaculovirusandCell
Construction
VirusandUL24
LocationofDuckEnteritis
gH
Abstract
Duckviralenteritisisall andblood diseaseof
acute，feverouspoisonous waterfowl(duck,
and DockEnteritisVims．The41 DEVORFsWeredoncdatlcast
gooseswan)causedby eomplete
studiedinthispaper．
atpresentandthepropertiesof#andUL24Were
ConstructionofrecombinantbaculovirusofDEVand to and
grI U124：accordinggagene
dams of and for
UL24 ofDEV in
gene publishedGenbank,3pairsprimerspl／p2，p3／p4pS／p6
was
of andUL24Were dividedintotwo
amplification
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