HPLC法测定感冒软胶囊中胡薄荷酮的含量.docVIP

HPLC法测定感冒软胶囊中胡薄荷酮的含量 　　摘要：目的：建立HPLC法同时测定感冒软胶囊中胡薄荷酮含量的方法。方法：采用Diamonsil C18 色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），用甲醇-水梯度洗脱，检测波长250nm，柱温35℃，流速1.0mL?min-1，进样量10μL。结果：胡薄荷酮与其他杂质峰分离良好。胡薄荷酮在0.393～6.286μg?mL-1与峰面积呈良好的线性关系（r= 　　0.9998），胡薄荷酮平均加样回收率为98.43%，RSD为0.80%（n=6）。结论：该方法操作简便，结果准确，可作为感冒软胶囊的质量控制方法。 　　关键词：HPLC 感冒软胶囊 胡薄荷酮 含量测定 　　感冒软胶囊是卫生部药品标准中药成方制剂第六册收录的品种，主要由羌活、麻黄、桂枝、荆芥穗、防风等14味中药材组成。用于外感风寒引起的头痛发热，鼻塞流涕，恶寒无汗，骨节酸痛，咽喉肿痛。荆芥穗是感冒软胶囊中具有抗病原微生物、解热、抗炎、镇痛作用的成分，本文采用HPLC法测定感冒软胶囊中胡薄荷酮的含量，获得满意效果，可用于产品质量控制。 　　1 仪器与试药 　　Agilent1200 高效液相色谱仪；赛多利斯股份公司CPA225D型电子分析天平（德国）；KQ-300 DA型超声波清洗器； UV-2550 型紫外分光光度仪（日本岛津）。胡薄荷酮对照品；甲醇为色谱纯；水为重蒸水。感冒软胶囊由石药中诺有限公司生产。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Phenomenex Luna C18（4.6mm×250mm， 　　5μm）；以甲酸溶液为流动相A，以水为流动相B，按表1中规定进行梯度洗脱；流速：1mL?min-1，柱温35℃；检测波长为250nm；进样量10μL。 　　表1 梯度洗脱条件 　　■ 　　2.2 溶液的制备 　　2.2.1 制备对照品溶液 　　准确称量胡薄荷酮对照品约1.965mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释待规定的刻度，并摇匀，即得39.3μg?mL-1胡薄荷酮储备液；再取8mL胡薄荷酮储备液，置50mL量瓶中，同时加入甲醇至规定的刻度，得到含胡薄荷酮6.288μg?mL-1的对照品溶液。 　　2.2.2 制备供试品溶液 　　精密称定1g感冒软胶囊内容物，并将其置于塞锥形瓶中，并精确加入20mL甲醇，称定其重量，对其超声处理30min，然后冷却到室温，再称量其重量，通过甲醇补足减失的重量，并摇匀，然后用0.22μm有机系微孔滤膜对其进行滤过处理。 　　2.2.3 阴性对照液 　　对于除荆芥穗、薄荷以外的其余药味，按照处方比例进行称取，同时依据感冒软胶囊制备工艺制成相应的阴性样品，根据供试品溶液制备方法制成阴性对照液。 　　2.3 系统适用性实验 　　分别取10μL对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，其色谱图如图1所示。 　　■ 　　A――对照品，B――供试品，C――阴性对照；1――胡薄荷酮 　　图1 　　2.4 线性关系考察 　　分别精密吸取对照品溶液，并用甲醇进行稀释，得到标准的溶液。含胡薄荷酮分别为0.393、0.786、1.572、3.144、6.288μg?mL-1，在液相色谱仪中注入10μL标准液，记录相应的色谱图。 　　2.5 精密度实验 　　按上述色谱条件，精密吸取含胡薄荷酮为1.572μg?mL-1的对照品溶液10μL，连续重复进样5 次，记录胡薄荷酮峰面积值分别为40.8，40.8，41.3，40.9，41.5，平均值为41.1，RSD为1.07%（n=5）。 　　2.6 重复性实验 　　取本品（批号0311428）内容物，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按色谱条件检测，精密吸取供试品溶液10μL，注入色谱仪，共进样5次，记录胡薄荷酮峰面积值分别为62.3，61.7，61.9，61.8，62.1，平均值为62.0，RSD为0.55%（n=5）。结果表明，本方法重复性良好。 　　2.7 稳定性实验 　　取本品（批号0311428）内容物，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按色谱条件，精密吸取供试品溶液10μL，分别在0，4，8，12，16，24h进样。 　　2.8 回收率实验 　　取6份已知含量的感冒软胶囊（批号0311428）内容物约0.5g，准确称量，分别加入到编号1～6的具塞锥形瓶中，分别精密加0.4mL、浓度0.0393mg?mL-1的胡薄荷酮对照品储备液，然后加入19.6mL甲醇，按照供试品溶液制备方法，计算回收率。平均回收率如表2所示： 　　表2 回收率试验结果 　　■ 　　2.9 样品含量测定 　　分别称取6批不同批号的感冒软