微囊化转心房肽因细胞治疗高血压的实验研究.pdf

微囊化转心房肽基因钏胞治疗高血压的实验研究 微囊化转心房肽基因细胞治疗高血压的实验研究 摘要 研究生 陈立国 导师 王正荣 目的 探讨人心房肽(hANP)基因转染细胞的微囊化方法以及 微囊化转hANP基因细胞治疗高血压的新途径和新技术。 方法 将重组hANP基因(cDNA)质粒转染中国仓鼠卵巢(CHO) 细胞，然后将细胞包被在具有免疫隔离作用的聚己内酯(PCL)微 囊内形成微囊化转基因细胞。采用免疫组织化学等方法检测 ¨NP eDNA质粒转染的CHO细胞在PCL微囊内长时间存活情 况和分泌的hANP浓度。检测微囊化hANPcDNA质粒转染细胞 分泌hANP的生物节律，并用褪黑素(melatonin)调整其分泌 eDNA质粒转染细胞至两 hANP的生物节律。移植微囊化hANP 肾一夹(2K1C)的高血压大鼠腹腔内，检测其对高血压大鼠的血 压以及多项生理指标、组织学改变的影响。同时研究微囊化b．ANP eDNA质粒转染细胞移植前后，2K1C高血压大鼠肾脏排泄的近同 节律的变化规律。对植入微囊化hANPeDNA质粒转染细胞的 2K1C大鼠的多项与基因治疗安全性相关的生理指标进行监测， 来评价此种基因治疗方法的安全性。 结果hANPeDNA质粒转染细胞和对照组细胞的免疫细胞化学 显示：在hANPeDNA质粒转染细胞浆中有棕色的颗粒形成，表 明在hANPeDNA质粒转染细胞浆中有免疫原性的hANP生成。 微燧化转心房肽基闭细胞治疗-岛血压的实验研究 长度20mm、直径3mm的PCL微鬟内hANP eDNA质粒转染CH0 绥毯分泌裂2ml璃葬基中熬hANP平均承平可达246．1pg／ml／24hr； hANP的分泌呈近Fq节律性变化，夜间高，而日间低；近同节律 交纯豹洚{妻跨葙怒4：i8。溺melatonin处疆后，近磊节德豹峰值 时相移至7：56。 移植微囊化hANPeDNA质粒转染细胞至2K1C高血压大鼠腹 黢患2天(d)后，大鼠黪盎压上歹}水平瞬显不如对照组态，她馋 用至少持续5个闷(m)。猩2K1C高血压大鼠体内，植入的微囊化 转hANPeDNA溪粒绍羹链可产璧三鹈显戆裂镄、裁霖{乍羯，显弓l越 肾血流、肾小球滤过率、尿cGMP水平较对照组明显升高。组织 学帮形态学研究袭碉：{蠹入豹徽囊纯转hANPeDNA质敉缁施侵 2K1C高』衄压大鼠肾小球硬化、嚼小囊损害、肾动脉肥1|掣程度均 较对照组减轻；弼时使心肌细胞腮大减辍，左室与全心蘸薰之眈 较对照组缡小；鼠hANP血浆水乎赢于对照组。此外，2K1C意 赢压大鼠的肾脏分泌的时间生物举特征研究结果履示：与对照组 穰毙，蕊入徽囊纯hANPeDNA缓粒转羧缨邃蜃，2K1C蒸蛊基 大鼠的肾脏分泌鼹示出明显的时间生物学特征，麒近日节律的调 熬中蓬鸯弱大，摄溺增高。同时，蒸嚣治疗安全瞧籀标鹣谱债结栗 eDNA质粒转染细胞至2K1C离血压大 表明：移植微囊化hANP 鼠腹腔10d后，多项与攀因治疗蜜全性相关的垒疆指标懑予正常 参考值。用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)检测从高血愿大鼠体 内取出的PCL微囊，显示hANPeDNA质粒转染细胞在PCL徽 囊包被棱入大鼠腹整5m蜃仍然存活。 eDNA质粒转染的CHO细胞能在PCL微囊内生存， 结论hANP 并能产生和淘囊争}jj}毒舆有生物活经鹃hANP。植入裔趣压大鬣 2 微囊化转心房肽基因细胞治疗高血压的实验研究 体内后，可以降低高血压大鼠血压，减轻高血压产生的并发症， 将来可能适于植入人体。此项研究结果提供了一条心房肽治疗高 血压或心衰的基因治疗新途径。 关键词： 心房肽 聚己内酯时间生物学 近日节律 高 血压 基因治疗 微囊化转基因细胞 —————————塑整些堑：生曼然苎鬯塑盥塑堕壶堡焦塑壅堕婴塾 0n Study