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旋毛虫kaza型丝氨酸蛋白酶抑制剂的克隆、表达及特性研究
目 录 ㈣ZⅢ7I 帆7 川¨川¨■-I mⅢm，， ㈣9吣5
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目 录
中文摘要………………………………………………………………………………………………I
英文摘要………………一…………………………………………………………………………．III
1前言…………………………………………………………………………………………………………………………………1
1．1丝氨酸蛋白酶抑制剂概况……………………………………………………………………1
1．2Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂概况…………………………………………………………．．1
1．2．1
Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构特征………………………………………………2
1．2．2
Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的作用机制………………………………………………2
1．2．3
Kazal型丝氨酸蛋自酶抑制剂的功能……………………………………………………2
1．3丝氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫中的研究进展………………………………………………3
1．3．1寄生性蠕虫丝氨酸蛋白酶抑制剂………………………………………………………3
1．3．2寄生性原虫丝氨酸蛋白酶抑制剂………………………………………………………5
1。4研究目的和意义………………………………………………………………………………5
2材料与方法…………………………………………………………………………………………7
2．1材料…………………………………………………………………………………………………………………………．．7
2．1．1虫种和实验动物…，．．……………………………………………………………………．7
2．1．2菌株和载体………………………………………………………………………………．．7
2．1．3主要试剂…………………………………………………………………………………．7
2．1．4主要仪器和设备…………………………………………………………………………7
2．1．5主要软件及网络资源．：…………………………………………………………………．．8
2．2试验方法………………………………………………………………………………………8
2．2．1
TsKaSPI基因克隆………………………………………………………………………．．8
2．2．2 1
2．2．3
TsKaSPI重组蛋白的诱导表达及表达条件优化………………………………………12
2．2．4
TsKaSPI重组蛋白的纯化及WesternBlot印迹………………………………………．13
2．2．5发色底物法检测重组蛋白酶活性……………………………………………………．．13
2．2．6重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究…………………………………………………。14
2．2．7旋毛虫KaSPI蛋白的抗原性检测……………………………………………………一14
3结果……………………～…．i……………………………………………………………………………………………………16
3．1基因克隆结果…………：……………………………………………………………………．．16
3．1．1旋毛形线虫肌幼虫目的基因片段RT．PCR扩增结果…………………………………16
3．1．2重组克隆质粒DNA的鉴定……………………………………………………………16
8
3．1．3信号肽预测结果………………………………………………………………………～1
3．1．4
NLS和NES预测结果…………………………………………………………………．19
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